[发明专利]一种复合酶法提取枇杷叶多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种复合酶法提取枇杷叶多糖的方法。

背景技术

枇杷，别名：芦橘、金丸、芦枝，拉丁文名：Eriobotrya japonica (Thunb.) Lindl。蔷薇科、枇杷属植物，枇杷原产中国东南部，因叶子形状似琵琶乐器而名。枇杷叶是枇杷的植物叶片，为双子叶植物蔷薇科枇杷的干燥叶，是传统中药的一种原料。在传统中药里，利用枇杷叶制备浸膏，具润肺、清热、止咳化痰等功效；利用蒸制法将枇杷叶取露，对人体有解暑热、清热等功效。近年来，相关研究已证实枇杷叶中含有多种化学成分和天然化合物，例如皂苷、糖苷、挥发油类、倍半萜类、三萜类化合物、多糖等。

多糖是枇杷叶的主要有效成分之一，除了具备抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、增强免疫功能等生物学效应外，还具备抗病毒、抗菌、降血脂、降血糖、抗辐射等功效。

枇杷大量分布于中国的东南部，其中攀枝花地处四川西南，具有明显的南亚热带气候优势，适合种植早熟枇杷，早熟枇杷是攀枝花市特色水果发展的支柱产业之一，其推广种植面积达4000余亩。将枇杷作为一种水果进行销售外，其叶也是重要的中药材原料，但并未对其成分及药理进行深入研究，因此大量的枇杷叶并未得到充分的开发利用，存在浪费现象。如果有一种好的提取方法，能够经济有效、步骤简单、易于推广提取出枇杷叶中的多糖成分，将有助于推广其中药制剂及枇杷叶提取物的药理研究，并同时带来经济效益。

发明内容

本发明的目的针对现有技术，提供一种复合酶法提取枇杷叶多糖的方法。

为实现本发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种复合酶法提取枇杷叶多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

a.枇杷叶预处理：将采收的枇杷叶进行清洗，干燥后粉粹，过100目筛，加入蒸馏水，煮沸后冷却备用；

b.复合酶预处理：将纤维素酶：果胶酶=（1~1.5）：1的复合酶加入进上述蒸馏水中，控制温度为40~50℃，持续1~2h；

c.水浴加热：将上述混合液水浴加热至90~95℃，持续2~3h；

d.离心：将上述加热后的混合液进行离心，取沉淀物；

e.萃取：采用有机试剂萃取上述沉淀物，取上清液；

f.沉淀：采用乙醇、甲醇或丙酮进行沉淀，即得。

进一步地，所述a.枇杷叶预处理步骤中，过筛后的枇杷叶粉按重量比1：（20~25）加入蒸馏水，煮沸后冷却备用。

进一步地，所述 b.复合酶预处理步骤中，复合酶按重量比1：（10~15）加入蒸馏水，使蒸馏水浸没复合酶。

进一步地，所述 b.复合酶预处理步骤中，pH值控制在4.5~5.5范围内。

进一步地，所述e.萃取步骤中，有机溶剂为三氯甲烷与正丁醇重量比为（4~5）：1的混合有机溶剂。

进一步地，所述e.萃取步骤中，采用有机试剂萃取3次，取上清液。

本发明采用酶法提取是利用酶选择性地破坏细胞壁，使细胞内成分更易溶解和扩散的原理，适用于药材提取，因此本发明具有条件温和、浸出率高、减少热敏成分降解等优点。

随着科学技术的发展，天然产物，特别是传统中药药材中的有效成分的提取引起了广泛关注并取得迅猛发展。本发明提供了一种高效、无毒的提取方法，收率达到了10%~14%，充分满足了相关药物的研发与制作。

多糖作为枇杷叶的有效成分之一，除了有抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、增强免疫功能等生物学效应外，还具备抗病毒、抗菌、降血脂、降血糖、抗辐射等功效。本发明通过复合酶法提取，可最大限度的保留其生物活性、提高其得率，对于多糖类天然提取药物的继续开发具有重要意义。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

一种复合酶法提取枇杷叶多糖的方法，包括以下步骤：

a.枇杷叶预处理：将采收的枇杷叶进行清洗，干燥后粉粹，过100目筛，过筛后的枇杷叶粉按重量比1：25加入蒸馏水，煮沸后冷却备用；

b.复合酶预处理：将纤维素酶：果胶酶=1.5：1的复合酶按重量比1：10加入蒸馏水，使蒸馏水浸没复合酶，控制温度为45℃，持续1h，pH值控制在5左右；

c.水浴加热：将上述混合液水浴加热至95℃，持续2h；

d.离心：将上述加热后的混合液进行离心，取沉淀物；

e.萃取：采用三氯甲烷与正丁醇重量比为4：1的混合有机溶剂萃取上述沉淀物，萃取3次，取上清液；

f.沉淀：采用乙醇、甲醇或丙酮进行沉淀，即得。