[发明专利]一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及草鱼优良品种选育及效果验证的方法，具体地说，是一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法。

【背景技术】

草鱼是我国四大家鱼之一，在我国已有近两千年的养殖历史。早期草鱼养殖用鱼苗主要是从天然水体中捕捞，靠天吃饭一直限制草鱼养殖行业的发展；草鱼人工繁殖技术突破后，我国出现了大规模草鱼养殖状况；目前，草鱼产量已多年保持在淡水养殖第一位。但目前草鱼养殖行业仍面临较多困扰，最重要的问题是草鱼种质资源正在不断衰退。不注重亲鱼的选育与更新、甚至进行逆向选育或近亲繁殖，是导致草鱼种质资源不断衰退的主要原因。

草鱼选育工作中最重要的环节是亲本的选择。在传统选育方法中，亲本的选择主要依据其形态特征，但亲本之间的亲缘关系不容易确定，会导致选育结果的不稳定性；且草鱼性成熟年龄较长，传统选育过程消耗大量的人力物力，选育结果也很难验证；尤为重要的是，我国草鱼养殖环境复杂，不同时间、地域有其独特性，需要有不同的优良品系，而传统选育方法自身特点很难满足这一要求。随着现代生物技术的发展，细胞、生化、分子等技术也逐渐应用于草鱼选育工作，已出现了抗性强或生长快的转基因草鱼品系。但大众对转基因的认同率普遍较低，转基因草鱼的发展受到一定限制。

中国专利文献200910197874.X，公开了一种养殖草鱼家系的构建和良种选育方法，该种方法能选育出优质、高产、稳产的草鱼新品种，但其需要分别对鱼种的夏花、1龄鱼、2龄鱼、3龄鱼、4龄鱼五个阶段进行优选，耗时长，而且该种方法没有涉及对草鱼的抗病毒、耐盐、耐低氧等优良品系的选育。因此，开发一种能针对不同地域环境，快速选育出具有生长优势及不同抗性的草鱼选育的方法是十分必要的。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，包括以下步骤：

(1)亲本的选择：选择体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的草鱼作为待选亲本；使用PIT标记对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，用12对微卫星对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus 3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性；对遗传多样性较低的待选亲本进行舍去，有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G₀；所述G₀为待选亲本中遗传多样性较高，用于后续选育实验的基本群体；所述12对微卫星序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.24所示。

(2)建立家系：G₀亲本性腺成熟后，一次人工注射激素进行催熟，人工授精获得受精卵；每个家系的受精卵放入一个孵化桶，室温下进行孵化，孵化桶底部进入流水，水从桶上面流出；不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小池塘饲养，池塘提前进行消毒，提前一周使用畜粪培育生物饵料，饲养过程中随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，同一家系鱼苗平均分配到两个或两个以上池塘进行1龄种鱼培育，并标记为G₁；所述G₁为G₀第一年子代。

(3)优良品系的筛选：同年12月对G₁的生长数据进行统计，并挑选个体较大、活泼健康的G₁进行抗性试验，取存活下来种鱼，并标记为G₁A；取G₁A的部分胸鳍，用无水乙醇保存，草鱼亲子鉴定技术找出G₁A相对应的亲本，并标记为G₀A，G₁中除去G₁A所剩下的群体标记为G₁B，G₀中除去G₀A所剩下的群体标记为G₀B；所述G₁A为G₁中具有生长优势且抗性试验存活的群体；所述G₀A为G₁A对应的亲本。