[发明专利]检测人HSP90α‑1蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人热休克蛋白90α-1(HSP90α-1)抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的HSP90α-1特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人HSP90α-1体外诊断试剂盒上的应用，人HSP90α-1体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人HSP90α-1蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

近年来，对肿瘤标志物的研究已经引起许多研究者的注意。寻找一种可靠的、非侵入式的、能反映肿瘤的发生、增殖分化的肿瘤标志物是众多研究者的共同心愿。通过对血液、组织液的研究，目前发现一些肿瘤标志物可以对肿瘤的发生、增殖分化进行预测。其中，人热休克蛋白90α-1(HSP90α-1)就是这样的一种肿瘤标志物。

热休克蛋白90α-1是热休克蛋白家族中的重要蛋白之一，其作为分子伴侣来参与调控、维持细胞内多种蛋白的构象和功能，在调节细胞生长、分化和凋亡等方面发挥重要的作用。近年发现，热休克蛋白90α-1作为伴侣蛋白对肿瘤的恶性转变、生长、增殖及侵袭有着重要的作用。有许多报道证实，人体肿瘤组织中，热休克蛋白的表达发生了改变。在不同部位的肿瘤组织中，热休克蛋白表达的改变并不一致。目前发现肿瘤病人血清中的HSP90α-1含量与肿瘤的恶性程度，尤其是转移正相关。因此，HSP90α-1有希望作为肿瘤诊断和预后的标志物。

检测血清中的HSP90α-1水平的最理想的方法为免疫检测。因此，寻找合适的具有免疫原性的HSP90α-1抗原表位肽、制备特异性的HSP90α-1抗原及抗体即成了重点。

荧光免疫层析方法测血液中的待测物操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽，灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。中国专利申请No.200910117820.8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条的制备方法及定量检测方法；中国专利申请No.200910047352.1公开了一种荧光免疫层析试纸及其制备方法和应用。然而，目前还没有针对人HSP90α-1蛋白的荧光免疫层析试纸。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了一种用于定量检测待测物中人HSP90α-1蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。

具体而言，本发明提供了：

一种用于定量检测待测物中人HSP90α-1蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人HSP90α-1蛋白，其中：

所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一HSP90α-1单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一HSP90α-1单克隆抗体来源于人HSP90α-1抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且

所述双抗体夹心法采用第二HSP90α-1单克隆抗体作为检测抗体，所述第二HSP90α-1单克隆抗体来源于人HSP90α-1抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；

所述人HSP90α-1抗原表位肽(1)和(2)分别为：

(1)Tyr-Pro-Arg-Asp-Arg-Leu-Asp-Pro-Arg-Pro-Gly-Ser-Pro-Ser-Glu-Ala-Ser；

(2)Tyr-Arg-Gly-Ile-Asp-Glu-Asp-Asp-Pro-Thr-Ala-Asp-Asp-Thr-Ser-Ala-Ala-Val-Thr-Glu。

优选地，所述第一HSP90α-1单克隆抗体是由第一HSP90α-1抗原制备而成的，该第一HSP90α-1抗原是通过使所述人HSP90α-1抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且

所述第二HSP90α-1单克隆抗体是由第二HSP90α-1抗原制备而成的，该第二HSP90α-1抗原是通过使所述人HSP90α-1抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。

优选地，所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。

优选地，所述荧光微球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或X-罗丹明等，其中优选为X-罗丹明；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。

优选地，所述荧光微球的激发波长为350～600nm，优选为390nm；发射波长为500～700nm，优选为615nm。