[发明专利]用于检测施马伦贝格病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，特别涉及一种用于检测施马伦贝格病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒。

背景技术

施马伦贝格病(Schmallenberg，SB)是2011年11月在德国北莱茵-威斯特法伦州施马伦贝格镇牛羊中发现的一种新的病毒性动物传染病，该病的主要临床特征是：受感染母羊流产、死胎，新生羔羊畸形、成活率下降，感染牛表现为腹泻、发热、产奶量下降等，对畜牧业造成了较大危害。

目前SB的实验室诊断方法主要包括细胞培养分离病毒等病原检测方法，以及酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）和中和试验（NT）等血清学方法。病毒分离通常是确诊疫病的金标准，但由于成年患病动物常不表现临床症状，难以掌握病毒血症的具体时期，且费时费力，因此病毒分离的实施受到一定的限制，不适应快速检测的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测施马伦贝格病毒的RT-LAMP引物组及试剂盒。

本发明的另一个目的在于提供上述RT-LAMP引物组及试剂盒在检测施马伦贝格病毒上的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一组用于检测施马伦贝格病毒的RT-LAMP引物，其是根据施马伦贝格病毒核衣壳蛋白基因序列的高度保守区域设计的，其包括一对外引物F3、B3，和一对内引物FIP、BIP。其核苷酸序列如下所示：

F3：5’-ACTAGCTGAAGCTAGTGC-3’（SEQ ID NO.1）；

B3：5’-TTGTTCCATAGCGTTGGC -3’ （SEQ ID NO.2）；

FIP：5’- ACATTGTATAACCATCGGCCCA-TCAGATTGTCATGCCCCT -3’ （SEQ ID NO.3）；

BIP：5’-GCCGAAATGTTCCTTGATGCTTT-TTTACATCCATATTGTCCTTGAG -3’ （SEQ ID NO.4）。

一种用于检测施马伦贝格病毒的RT-LAMP试剂盒，其含有上述的引物组。还含有RNA提取试剂、LAMP扩增试剂、施马伦贝格病毒阳性对照和阴性对照。

所述施马伦贝格病毒阳性对照为施马伦贝格病毒cDNA的质粒；所述阴性对照为无菌采取澳洲进口牛血清，经检测BSV、BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV为阴性。

以上所述的试剂盒在施马伦贝格病毒检测中的应用。

本发明建立的施马伦贝格病毒LAMP检测试剂盒及检测方法具有特异、敏感、快速、简便等优点，是在养殖场、基层实验室等场所开展快速检测的良好方法。

附图说明

图1为RT-LAMP检测SBV结果；

图2为RT-LAMP检测SBV结果（P：阳性对照；S1：样品；S2：样品；N：阴性对照）；

图3为RT-LAMP检测SBV产物电泳图（M: DNA Marker DL2000；P：阳性对照；S1、S2：样品；N：阴性对照）；

图4为 RT-LAMP检测SBV特异性试验荧光曲线；

图5为RT-LAMP检测SBV特异性试验显色结果；

图6为RT-LAMP检测SBV特异性试验电泳结果（M: DNA Marker DL2000；1: SBV；2: IBRV；3: BTV；4: EHDV；5:BVDV；6: AKV；B:空白对照；N:阴性对照）；

图8为RT-LAMP检测SBV敏感性试验显色情况；

图7为RT-LAMP检测SBV敏感性试验荧光曲线；

图9为RT-LAMP检测SBV敏感性试验电泳结果（M: DNA Marker DL2000；1：10^-1稀释；2：10^-2稀释；3：10^-3稀释；4：10^-4稀释；5：10^-5稀释；6：10^-6稀释7：10^-7稀释；8：10^-8稀释）。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

实施例1 引物设计