[发明专利]脐带组织块冻存方法

权利要求书

1.脐带组织块冻存方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：

一、组织块的处理：

在无菌工作台内，将脐带通过体积百分浓度75％的酒精消毒处理，然后用生理盐水清洗2次，将清洗后的脐带剪成长度为2～3cm的段，然后放在平皿内，剥离华通式胶，将华通式胶置于洁净的离心管内，用手术剪剪碎至1～2mm³的块状；

二、组织块的冷冻：

向组织块中加入DMEM，DMEM的体积为组织块体积的二分之一，重悬组织块后加入与DMEM等体积的预冷冻存液，然后按每管1mL分装到冻存管中，采用程控降温仪降温，具体为：先于4℃平衡30min，然后以1℃/min的速度降至-5℃，接着以21℃/min的速度降至-54℃，再以10℃/min的速度升温至-21℃，然后以2℃/min的速度降至-40℃，接着以10℃/min的速度降至-80℃，最后于-196℃过夜保存，待细菌检测，微生物检测和病毒检测均为阴性后转入液氮中长期保存，即完成脐带组织块的冻存。

2.根据权利要求1所述的脐带组织块冻存方法，其特征在于将清洗后的脐带剪成长度为2.5cm的段。

3.根据权利要求1或2所述的脐带组织块冻存方法，其特征在于用手术剪剪碎至1.5mm³的块状。

4.根据权利要求3所述的脐带组织块冻存方法，其特征在于所述冻存液由6.8～7.2mLDMEM、0.7～1.2mL胎牛血清、0.1～0.2mL L-谷氨酰胺和2mL二甲基亚砜组成，配制好后于4℃预冷保存。

5.根据权利要求3所述的脐带组织块冻存方法，其特征在于所述冻存液由6.9～7.1mLDMEM、0.8～1.1mL胎牛血清、0.15mL L-谷氨酰胺和2mL二甲基亚砜组成，配制好后于4℃预冷保存。

6.根据权利要求3所述的脐带组织块冻存方法，其特征在于所述冻存液由7mL DMEM、1mL胎牛血清、0.15mL L-谷氨酰胺和2mL二甲基亚砜组成，配制好后于4℃预冷保存。