[发明专利]抑制黄色色素积累同时积累番茄红素和花青素苷在制备花瓣呈红色芸薹属植物中的应用

权利要求书

1.干扰芸薹属植物花瓣中β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111基因表达同时异位表达TT8 基因在制备花瓣呈红色的芸薹属植物品种中的应用，其特征在于：用于干扰芸薹属植物花瓣中β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111 基因表达的序列如SEQ ID NO.2 所示，用于异位表达TT8 基因的序列如SEQ ID NO.3 所示。

2.根据权利要求1 所述的应用，其特征在于：用于干扰芸薹属植物花瓣中β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111 基因表达的序列由拟南芥花瓣特异启动子PAtAP3 介导表达，所述花瓣特异启动子PAtAP3 的核苷酸序列如SEQ ID NO.1 第267 位至第1044 位所示。

3.根据权利要求1-2任一项所述的应用，其特征在于：所述芸薹属植物为甘蓝型油菜(Brassica napus)。

4.干扰芸薹属植物花瓣中β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111基因表达同时异位表达TT8 基因的植物表达载体，其特征在于：所述植物载体包括由花瓣特异启动子介导的表达β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111 基因RNA 干扰序列的表达框和由组成型启动子介导TT8 基因的表达框；

所述花瓣特异启动子介导表达β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111 基因RNA 干扰序列的表达框依次由花瓣特异启动子PAtAP3、SEQ ID NO.2 所示的序列、间隔序列、SEQ ID NO.2 所示的序列的反向互补序列和OCS 终止子组成；

所述由组成型启动子介导TT8基因的表达框依次由CaMV35S 启动子，SEQ ID NO.3 所示序列和NOS 终止子组成；

其制备方法如下：将SEQ ID NO.1 所示序列经AscI 和SwaI 双酶切后连入经同样酶切的pFGC5941M 质粒，得pFGC5941CEPE 质粒，然后将SEQ ID NO.2 所示的序列连入pFGC5941CEPE 载体的PAtAP3 启动子与间隔序列之间，形成中间载体pFGC5941CEPE-B4RNAia，再将SEQ ID NO.2所示序列反向连入中间载体pFGC5941CEPE-B4RNAia 的间隔序列与OCS 终止子之间，得pFGC5941CEPE-B4RNAi 载体，最后将SEQ ID NO.3 所示序列通过NcoI 和AscI 酶切位点连入经同样酶切的pFGC5941CEPE-B4RNAi 载体，得干扰芸薹属植物花瓣中β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111 基因表达同时异位表达TT8 基因的植物表达载体。

5.权利要求4所述植物表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将SEQ ID NO.1 所示序列经AscI 和SwaI 双酶切后连入经同样酶切的pFGC5941M 质粒，得pFGC5941CEPE 质粒，然后将SEQ ID NO.2 所示的序列连入pFGC5941CEPE 载体的PAtAP3 启动子与间隔序列之间，形成中间载体pFGC5941CEPE-B4RNAia，再将SEQ ID NO.2所示序列反向连入中间载体pFGC5941CEPE-B4RNAia 的间隔序列与OCS 终止子之间，得pFGC5941CEPE-B4RNAi 载体，最后将SEQ ID NO.3 所示序列通过NcoI 和AscI 酶切位点连入经同样酶切的pFGC5941CEPE-B4RNAi 载体，得干扰芸薹属植物花瓣中β- 环化酶基因LCYB、ε- 环化酶基因LCYE、MYB12 和MYB111 基因表达同时异位表达TT8 基因的植物表达载体。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述间隔序列为甘蓝型油菜PAP2 基因第2 内含子。

7.利用权利要求4所述植物表达载体制备花瓣呈红色的芸薹属植物品种的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a. 将权利要求4所述植物表达载体转化农杆菌，制得工程菌；

b. 将步骤a 所得工程菌转化芸薹属植物无菌苗的下胚轴，共培养后，在Basta 除草剂抗性下诱导分化获得再生苗，筛选阳性苗转基因苗得花瓣呈红色的芸薹属植物品种。