[发明专利]一种用于检测膀胱癌的探针组及基因芯片

说明书

技术领域

本发明涉及生物基因领域，具体涉及一种用于检测膀胱癌的探针组及基因芯片。

背景技术

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤。是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。占我国泌尿生殖系肿瘤发病率的第一位，而在西方其发病率仅次于前列腺癌，居第2位。2012年全国肿瘤登记地区膀胱癌的发病率为6.61/10万，列恶性肿瘤发病率的第9位。膀胱癌可发生于任何年龄，甚至于儿童。其发病率随年龄增长而增加，高发年龄50～70岁。男性膀胱癌发病率为女性的3～4倍。膀胱癌癌主要是根据患者既往史、家族史，结合症状和查体做出初步判断，并进一步进行相关检查。检查方法包括尿常规检查、尿脱落细胞学、尿肿瘤标记物、腹部和盆腔B超等检查。根据上述检查结果决定是否行膀胱镜、静脉尿路造影、盆腔CT或/和盆腔MRI等检查明确诊断。其中，膀胱镜检查是诊断膀胱癌的最主要方法。目前，膀胱癌尚没有有效早期诊断与预后指标。

基因芯片(Gene Chip)是将大量的寡核苷酸分子固定于固相载体上形成DNA微点阵，借助核苷酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效解读和分析。

基因芯片起源于20世纪80年代，近年来得到了迅猛的发展，但主要是应用于医药和研究领域，目前并没有将基因芯片技术应用于膀胱癌早期检测的报道。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了特异性好、灵敏度高、准确率高的用于检测膀胱癌的探针组及基因芯片。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种用于检测膀胱癌的探针组，由探针1-探针25共25条探针组成，所述探针1-探针25的核苷酸序列依次分别为序列表中的序列1-25。

用于检测膀胱癌疾病的探针组，包括25个基因片段，其中第25种基因片段为质控基因，25个基因片段是针对膀胱癌的25个指标而设计的，利用25个基因片段共同来检测膀胱癌基因表达谱的改变，进而对膀胱癌进行侦检和预后监控。

25种基因片段如表1和表2所示，其中表1为序列1-13，表2为序列14-25：

表1

表2

25个基因片段的详细序列如序列表1-2中序列1-25所示。

上述用于检测膀胱癌的探针组可应用于生物芯片技术(包括基因芯片技术、蛋白芯片技术、组织芯片技术、细胞芯片技术等)、聚合酶链反应(PCR)、核酸分子杂交技术以及其他病原体基因诊断技术。

本发明的第二个目的是提供了一种用于检测膀胱癌的基因芯片，所述基因芯片是将上述的寡核苷酸探针1-25通过手臂分子固化在载体材料上形成的探针阵列。

进一步的，上述的一种用于检测膀胱癌的基因芯片，所述探针1-探针24为检测寡核苷酸探针，探针25为质量控制寡核苷酸探针。

进一步的，上述的一种用于检测膀胱癌的基因芯片，所述基因芯片中的探针标记技术为核素标记、生物素标记、地高辛标记、荧光素标记、胶体铁标记、胶体金标记或联合标记。

本发明的第三个目的是提供了上述的用于检测膀胱癌的基因芯片在检测早期膀胱癌中的应用。

进一步的，上述的应用，所述检测早期膀胱癌过程中，检测样本为膀胱癌新鲜组织或膀胱癌患者的尿脱落细胞。

本发明的有益效果为：本发明所提供的将探针组和基因芯片应用于膀胱癌的早期检测在我国尚属首次，这将会极大促进膀胱癌早期诊断的发展，具体有以下优点：

1、特异性好：现有的膀胱癌的诊断仅是检测一个或几个指标缺乏特异性，所以容易引起误诊，尤其是早期膀胱癌的误诊率更是高达70％以上。本发明用于检测膀胱癌的新的基因组合可同时检测膀胱癌病原体的25个指标，特异性高达95％；

2、灵敏度和准确率高：敏感性达95％，临床符合率(准确率)达95％；

3、可对膀胱癌进行快速侦检和预后监控；

4、可用于各种类型的膀胱癌的诊断和预后监控，尤其可用于早期膀胱癌的诊断。

为保证基因芯片的质量，应注意以下事项：

1)样品核酸的提取：提取的核酸必须具有较高的纯度(OD260/0D280比值应大于1.50)和一定的量(应10ng-100ng)，以保证标记的质量和特异性扩增，如果纯度不够，可能导致后面的杂交出现非特异点；

2)样品核酸的标记：掺入的标记物必须达到一定的浓度(每个反应掺入的标记物为0.1-1μg)，以保证杂交点的灵敏度，若浓度不够，杂交结果常会出现假阴性；