[发明专利]一种浸染蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白染色技术，具体是一种利用核桃青皮浸出液作为染色液浸染蛋白的方法。

背景技术

目前，在生物科学领域研究蛋白质时，经常用到聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，以分析其功能成分的变化及作用关系，通过分析蛋白凝胶电泳后的色带图谱，可识别不同的蛋白，其中的显色技术是关键。考马斯亮蓝染色法是最常用的染色方法。实验过程中配制试剂较多且都为化学合成试剂，对人体有一定的伤害，且费时费力(考马斯亮蓝染色后需用甲醇和乙酸复合液作为脱色液，且脱色时间通常要过夜)。

发明内容

鉴于已有技术存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种浸染蛋白的方法，该方法经济、环保，操作简单，工作效率高。

为实现上述目的，本发明所采用的技术解决方案是：

1)提取植物蛋白

2)将植物蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝胶电泳，得到待染色的蛋白胶；

3)将蛋白胶置于放有浓度为70-90％的核桃青皮染液的盘或皿中染色15-25分钟(浸出液需淹没胶体本身)；

4)然后用乙醇脱色3-5小时即可；

所述的核桃青皮染液通过如下方法制备得到：A)取核桃青皮原料洗净，组织捣碎机捣碎取汁液，过滤去渣后快速放入加盖的容器中；B)每500ml汁液加1粒维C片作为抗氧化剂；C)加热至65℃-75℃使其浓缩至浓度为20％-30％，于4℃冰箱保存。

所述步骤3)中染色时间优选为20分钟。

所述步骤3)中核桃青皮染液的浓度优选为80％。

本发明的有益效果：

核桃青皮浸出液作为纯植物染液，环保性强，染色时间较短，本身具有抗菌杀虫作用，因此该染色液不需加防霉抗菌剂。脱色液也较单一仅乙醇一种，操作性强，毒副作用较甲醇小。

总之，本发明使用纯植物染液，成本低、环保；方法简单，技术难度小，易掌握；适宜于快速判定蛋白不同组分和大小的研究。

附图说明

图1：核桃青皮染液浸染白菜总蛋白电泳图

具体实施方法

实施例1

1、制备核桃青皮染液：

(1)取核桃青皮原料洗净，组织捣碎机捣碎取汁液，过滤去渣后快速放入加盖的容器中；

(2)每500ml汁液加1粒维C片；

(3)加热至65℃-75℃使其浓缩至浓度为20％-30％，于4℃冰箱保存。

2、提取白菜叶片总蛋白：

(1)1g样品加入3.5ml蛋白质提取液，准备提取液放在冰上；

(2)把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置3小时；

(3)用离心机离心8000rpm 40min 4℃；

(4)提取上清液，样品制备完成。

蛋白质提取液：300ml 1、1MTris-HCl(PH8)45ml 2、甘油(Glycerol)75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g。

3、将提取出的白菜总蛋白提取液跑聚丙烯酰胺凝胶电泳；

(1)制备分离胶和浓缩胶；

(2)四泳道分别上样20微升、18微升、16微升、14微升；

(3)80V跑20分钟，然后调高电压到120V，直到溴酚蓝跑到板底停止；

4、将跑好待染色的胶置于放有80％核桃青皮染液的盘或皿中染色20分钟(浸出液淹没胶体本身)；

5、经乙醇脱色4小时；

6、脱色后可见到大小不同的清晰条带(见图1)。由于上样量不同，所以各泳道条带粗细有差别。