[发明专利]一种建立昆明山海棠快繁体系的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物快速繁殖方法，特别是一种建立昆明山海棠快繁体系的法。

背景技术

昆明山海棠(Tripteryg ium hypoglaucum(Lv.1)Hutch)，是卫矛科(Celastraceae)雷公藤属落叶木质藤本植物。《滇南本草》中以“紫金皮”为其药物名称；昆明山海棠俗称“火把花”，始载于李时珍《本草纲目》草部毒草类钩吻条，“生滇南者花红、呼为火把花”。不同民族对该植物药用部位或为根、根皮及茎枝，民间常以木质藤茎入药，或将根及全株作为金刚藤的习用品；根皮、嫩枝叶在乡下常被农民用作植物性杀虫剂或农药使用。昆明山海棠被中医用于杀虫、舒筋活络、清热解毒、祛风除湿等，是药典品种“昆明山海棠片”的原料药材。国内研究相继发现昆明山海棠在众多自身免疫性疾病(如红斑狼疮等)、肿瘤与白血病、计划生育药物以及HIV等方面的重要价值。美、日、法等国均研究团队对该植物活性成分进行深入系统研究，并已取得许多重要成果。使之成为世界瞩目的药用植物资源。

该植物曾广泛分布于我国长江以南部分省区及西南地区如云南、四川、贵州、广西、湖南、江西等省区，四川攀西地区是主要分布区之一。药材和原料全部依赖野生资源采挖。由于疗效独特的药品市场需求增加及新药产品的开发。昆明山海棠分布区急剧萎缩。自然更新非常困难。野生资源面临危机。因此，如何保护和可持续利用昆明山海棠资源不但对中药和民族药具有重要意义，也具有重要的经济价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种建立昆明山海棠快繁体系的方法，本发明中利用组织培养技术，不受外界自然条件影响，利用茎节扩繁，产生大量的母种，大规模的扩大种苗生产，满足种植的需求，解决资源紧缺问题。

本发明提供的技术方案是：

一种建立昆明山海棠快繁体系的方法，包括以下步骤：

步骤一、取处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，培养8-12天即可获得昆明山海棠小芽；其中，诱导培养基为：以N₆₈为基本培养基，加入0.1-2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、0.1-1.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0g/L赤霉素、0.5-3.0mg/L噻苯隆、30-50g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为5.8-6.2；

步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，培养25-30天获得昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入3.0-5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、2.0-5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L萘乙酸、0.5-4.0mg/L吲哚丙酸、3-5g/L蔗糖及3.0-6.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.8-6.2；

步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养25-30天，获得昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入0.8-3.0g/L吲哚丁酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.5-2.0g/L赤霉素、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.3；

步骤四、将昆明山海棠生根组培苗移栽至苗床上，待昆明山海棠小苗生长稳定，即可移栽至大田。

优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，步骤一所述取昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基之前，先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽用80-85％乙醇溶液浸泡1-2分钟，升汞消毒8-10分钟，清洗干净后切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽。

优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，步骤四所述的苗床基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩。

优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，步骤四中将昆明山海棠生根组培苗移栽至苗床之前，先将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，在移栽至苗床上。

优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，所述步骤一至步骤三中，昆明山海棠于培养基中的培养条件均为：培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d。