[发明专利]一种虫草素前体脂质体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种虫草素前体脂质体的制备方法。

背景技术

虫草素又名虫草菌素，是核苷类的生物碱，分子式为C₁₀H₁₃N₅O₃(分子结构如I所示)，相对分子量251，熔点231℃。

研究表明，作为蛹虫草中的活性成分，虫草素具有多种药理作用：比如抗病毒、抑菌、免疫调节和抗肿瘤等。对许多临床上的疾病都有潜在的治疗作用，具有非常广阔的应用前景和市场。

虫草素的抗肿瘤作用比较显著。研究表明虫草素对人组织淋巴瘤细胞U937、艾氏腹水瘤细胞、白血病细胞HL-60和人宫颈癌HeLa细胞等具有比较显著的抑制作用，对多种恶性肿瘤均有抑制作用。但是虫草素作为核苷类的生物碱，在生物体内代谢速度很快，限制了它的抗肿瘤等药理活性的发挥。因此，有很多研究致力于增加虫草素的体内活性研究。如中国专利CN101574362公开了一种N-烷酰基虫草素在制备治疗肿瘤疾病的药物中的应用。经过酰基化后虫草素的活性增强。中国专利CN103191197A公开了靶向式抗肿瘤抗癌药剂及其制备方法，利用含0.05％～0.15％的虫草素复合制剂进行抗肿瘤。

脂质体是由磷脂双分子膜组成的，具有类细胞结构的靶向药物载体。脂质体可以在内水相包封水溶性药物，也可以在磷脂双分子膜中包封脂溶性药物。脂质体制剂在生物体内主要被网状内皮系统吞噬，进而激活机体的自身免疫功能，改变被包封药物的体内分布，使包封的药物主要集中靶向肝、脾、肺和骨髓等网状内皮细胞丰富的组织或器官中，提高药物的治疗指数、降低药物毒副作用。脂质体广泛用作抗肿瘤药物的载体。中国专利CN103622924A公开了一种多西他赛脂质体及其制备方法，采用将磷脂膜吸附于水溶性载体上，得粉体状态的脂质体，用于抗肿瘤药物脂质体制剂。

发明内容

本发明的目的是将虫草素制成脂质体，利用脂质体在体内的肿瘤靶向作用，提高药物在体内的靶向性能，对推进增加虫草素的制剂学研究和临床应用都具有重要意义。

本发明的目的还在于制备虫草素的靶向制剂，进一步增强虫草素的体内抗肿瘤活性。为达到此目的，本发明提供一种虫草素前体脂质体的制备方法。

为了制备虫草素前体脂质体，尝试了不同的脂质体制备方法，如乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法和pH梯度法等。经大量的实验最终采用了反相蒸发法结合冷冻干燥方法制备虫草素的前体脂质体，并以包封率为指标筛选得到较优的制备方法。

本发明采用如下技术方案：一种虫草素前体脂质体的制备方法，包括如下步骤：

1)将卵磷脂与胆固醇溶于适量氯仿中，作为油相；虫草素磷酸盐缓冲液作为水相；控制油相与水相混合，超声1～10min成乳，置旋转蒸发仪上减压除去有机溶剂氯仿，在瓶壁上形成胶态，补加蒸馏水适量，继续旋转蒸发形成虫草素脂质体混悬液；

2)向虫草素脂质体混悬液中加入乳糖溶液，在-20～-70℃下预冻4～24h，抽真空，继续冷冻干燥40～60h，得到虫草素前体脂质体。

上述的一种虫草素前体脂质体的制备方法，卵磷脂与胆固醇的质量比为2:1～8:1。

上述的一种虫草素前体脂质体的制备方法，所述的虫草素磷酸盐缓冲液的浓度为0.5～1mg/ml。

上述的一种虫草素前体脂质体的制备方法，油相与水相的体积比是3:1～7:1。

上述的一种虫草素前体脂质体的制备方法，所述的乳糖溶液的浓度为4～10％，优选的，乳糖溶液的浓度为5～8％。

上述的一种虫草素前体脂质体的制备方法，优选的，在-40℃下预冻6h，抽真空，继续冷冻干燥40h，得到虫草素前体脂质体。

本发明，首先，采用反相蒸发法制备虫草素脂质体混悬液；其次，采用冷冻干燥方法制备虫草素前体脂质体。

本发明的有益效果是：

1、采用本发明反相蒸发、冷冻干燥法制备的虫草素前体脂质体，在室温条件下，采用Nicomp TM 380亚微粒径分析仪分别测定脂质体在冷冻干燥前后的粒径分布和粒径，冷冻干燥前虫草素脂质体混悬液的平均粒径为337.3nm，冷冻干燥后虫草素前体脂质体在水化后的平均粒径为181.2nm。采用葡聚糖凝胶(Sephadex-G75)柱层析法测定了虫草素脂质体混悬液的包封率为46.3％，虫草素前体脂质体的包封率为48.5％。