[发明专利]一种快速检测发酵液中L-谷氨酰胺含量的方法

权利要求书

1.一种快速检测发酵液中L-谷氨酰胺含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、取谷氨酰胺的生产菌株，活化后接入种子罐进行培养，然后以10%的接种量移种至发酵培养基中进行培养，得到发酵液，备用；

步骤二、取步骤一得到的发酵液，先置于涡旋振荡器中振荡2-4min，振荡结束后取1.5mL置于离心管中在10000rpm条件下离心3-5min，得到待测液，备用；

步骤三、按照3:1:0.2-0.5的体积比取正丙醇、氨水和甲醇，混合均匀，得到展开剂，备用；配制质量浓度为0.2-0.5%的茚三酮丙酮溶液，得到显色剂，备用；按照2:25:7-10的体积比为取质量浓度为0.1%的CuSO₄溶液、乙醇溶液和质量浓度为10%的乙酸溶液，混合均匀，得到洗脱液，备用；

步骤四、配制0.5g/L、1g/L、2g/L、3g/L 、4g/L 、5g/L 、6g/L 、7g/L 、8g/L 、9g/L和 10g/L谷氨酰胺的标准溶液，先在薄层硅胶板上进行点样，每个点0.2uL，然后置于层析缸中展开，展开完成后置于烘箱中在105℃条件下烘干3-5min，烘干完成后喷洒步骤三得到的显色剂进行显色，然后再将薄层硅胶板置于烘箱中在110-120℃条件下烘干2min，烘干结束后用刀将显色斑点刻下，再将刻下的硅胶于试管中用10mL洗脱液洗脱25-30min，然后用紫外-可见光分光光度计测定其在515nm处的吸光值，绘制标准曲线，备用；

步骤五、取步骤二得到的待测液在薄层硅胶板上进行点样，每个点0.2uL，然后置于层析缸中展开45min，层析缸中盛放有步骤三得到的展开剂，展开完成后置于烘箱中在105℃条件下烘干3-5min，烘干完成后喷洒步骤三得到的显色剂进行显色，然后再将薄层硅胶板置于烘箱中在110-120℃条件下烘干2min，烘干结束后用刀将显色斑点刻下，得到含酸硅胶，备用；

将上述得到的含酸硅胶置于10ml步骤三得到的洗脱液中，洗脱25-30min后，取样，用紫外-可见光分光光度计测定其在515nm处的吸光值，每个样品测定三次，然后在步骤四得到的标准曲线中取得对应值，即得到发酵液中L-谷氨酰胺的含量。

2.如权利要求1所述的一种快速检测发酵液中L-谷氨酰胺含量的方法，其特征在于：步骤一所述的发酵培养基中，按照质量百分数以下营养成分的含量分别为葡萄糖3-7%、玉米浆1-3%、NH₄Cl 2-4%、KH₂PO₄ 0.2-0.4%、MgSO₄  0.08-0.2%、KCl 0.1-0.2%；按照每升计，以下营养成分的添加量分别为酵母粉1-1.5g/L、FeSO₄ 10-20mg/L、CuSO₄ 2-10mg/L、硫胺素1-10mg/L；所述的发酵培养基中还添加有质量百分数为0.1-0.2%的抑制剂柠檬酸，以及由MnCl₂和ZnSO₄  组成的谷氨酰胺合成酶的激活剂，且添加量分别为MnCl₂ 50-150mg/L和ZnSO₄ 10-80mg/L。

3.如权利要求1所述的一种快速检测发酵液中L-谷氨酰胺含量的方法，其特征在于：步骤二所述置于涡旋振荡器中进行振荡的发酵液的温度为50℃。