[发明专利]一种可调节磁场的磁式细胞分选方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种可调节磁场的磁式细胞分选方法。

背景技术

磁式细胞分选的基本原理是借助偶联在磁性微粒上抗体高特异性识别并标记目标细胞表面抗原，再让混有磁珠的细胞悬液通过磁场，结合了磁珠的细胞被吸附在磁场侧壁上，而未结合的细胞被除去，得到纯化的目标细胞，从而实现高效的分选和富集。磁式分选高效快速，可在2-30分钟内实现105到1011个细胞分选。磁式细胞分选可手动完成，简单快速，不需要特别昂贵的设备，对实验和技术要求较低，实验流程对细胞损伤小，无菌和细胞状态更有保证，分选得到的细胞可进行培养、血液回输或者流式分析。

磁式细胞分选产品比较著名的品牌包括德国美天旎(MACS)，Invitrogen旗下Dynal，BD公司，StemCel l公司，R&D公司等等。根据生产公司的不同，磁珠大小差异很大。德国美天旎(MACS)磁珠是由多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒，无毒性，微珠直径约有50nm；Dynal公司的Dynabeads磁珠是由氧化铁磁性材料合成的均一超顺磁微球，大小有三种，直径分别为4.5um、2.8um和1um；BD公司的IMag磁珠大小介于MACS磁珠和Dynabeads之间，直径约为200nm；R&D公司则提供了链酶亲和素结合的磁珠，直径约为150nm，有点像胶体颗粒。目前不同直径的磁珠用于细胞分选时，只能使用各自公司的分选磁场。如美天旎公司的μMACS，MiniMACS等产品、Dynal的DynaMag-15和DynaMag-50分选架、BD公司的Imagnet、R&D的MagCel lect磁力架、StemCel l公司的EasySep和RoboSep等。

由于各个公司提供的磁珠和磁场互不兼容，当使用不用公司的磁珠时，都需要单独购买一套磁分选磁场设备，而这些设备往往价格特别昂贵。因此，本领域迫切需要开发一种可以兼容各个公司生产的不同直径磁珠的细胞分选方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种可调节磁场的磁式细胞分选方法。通过调节磁场与磁珠悬浊液距离的方式，动态调节磁场大小。可以适应不同公司、不同直径的磁珠，具有很高的兼容性。同时配合旋转搅拌装置，可以减小分选时间，在提高分选效率的同时加大细胞分选的回收率和纯度。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种可调节磁场的磁式细胞分选方法，依次包括如下步骤：

(1)样品放入：将样杯远离磁分选磁场设备的磁铁，将包含有目标细胞、标记磁珠和杂散细胞的混浊液放入样杯中；

(2)搅拌混匀：拌头向下插入样杯，缓慢加速旋转，使磁珠与目标细胞充分结合；

(3)静止分选：停止搅拌，将样杯放置于分选设备磁场的磁铁上方，调节样杯与磁铁之间的距离，采用磁力计监测样杯底部磁场强度，使样杯底部磁场强度与使用的磁珠相匹配，将磁珠和磁珠标记的细胞吸附在样杯底部，静止5-15分钟后，用移液的方式将上清液移出；剩余在样杯内的就是分选后的细胞。

所述步骤(1)中样杯与磁铁(3)之间的距离大于20cm。

所述标记磁珠为德国美天旎磁珠、Dynal公司的Dynabeads磁珠、BD公司的IMag磁珠、StemCel l公司磁珠和R&D公司的链酶亲和素结合磁珠中的一种。

所述磁分选磁场设备为美天旎公司的μMACS和MiniMACS产品、Dynal的DynaMag-15和DynaMag-50分选架、BD公司的Imagnet、R&D的MagCel lect磁力架、StemCel l公司的EasySep和RoboSep中的一种。

本发明的有益效果是：通过调节磁场与磁珠悬浊液距离的方式，动态调节磁场大小。可以适应不同公司、不同直径的磁珠，具有很高的兼容性。同时配合旋转搅拌装置，可以减小分选时间，在提高分选效率同时加大细胞分选的回收率和纯度。

附图说明

图1是本发明方法的磁力分选装置的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明：

本发明的磁分选磁场设备的工作原理与现有技术是相同的，可以参考现有技术，所以不再叙述，本发明与现有技术的不同点是分选方法不同，下面进行详细的说明：

本发明的可调节磁场的磁式细胞分选方法，依次包括如下步骤：

(1)样品放入：将样杯远离磁分选磁场设备的磁铁，将包含有目标细胞、标记磁珠和杂散细胞的混浊液放入样杯中；