[发明专利]抗体‑干扰素异二聚体的制备和用途

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤学领域。特别地，本发明提供了具有显著抗肿瘤活性、高表达量和较长的体内半衰期的异二聚体蛋白。

背景技术

尽管肿瘤相关的抗原可能引起免疫反应(Hrouda等人，1999，Semin.Oncol.26：455-471；Disis等人，1997，J.Clin.Oncol.15：3363-3367)，但是引起疾病的致癌性细胞不能引起免疫反应从而被免疫系统消灭。许多研究已表明，有可能通过向肿瘤细胞中引入免疫刺激分子，例如干扰素，来增强肿瘤细胞的免疫原性(Dranoff和Mulligan，1995，Adv.Immunol.58：417-454；Hrouda等人，1999，Semin.Oncol.26：455-471；Hurford等人，1995，Nat.Genet.10：430-435)然而，如何将特定的免疫刺激因子靶向所针对的癌细胞，并且实现高效且准确的靶向是本领域技术人员面临的巨大挑战。此外，要治疗肿瘤需要根除残余的癌细胞，而这些细胞可能因为数量极少、位置分散、隐蔽等多种原因而难以被有效地靶向。

为了抵抗病原性细菌的感染和/或抵抗肿瘤，需要引发受试者的先天性免疫反应和获得性免疫反应。先天免疫系统中的细胞所产生的细胞因子可以直接或间接地激活获得性免疫反应中的细胞，并且在引发保护性抗肿瘤免疫中发挥重要作用(Belardelli和Ferrantini，2002，Trends Immunol.23：201-208)。在这方面，促炎性细胞因子(例如干扰素)的释放对于激活先天免疫系统起重要的作用。

目前通常将干扰素分为三种主要的类型，即Ⅰ型、II型和III型。其中，Ⅰ型干扰素包括IFN-α和IFN-β，其中IFN-α又包括IFN-α2、IFN-α4等亚型。Ⅰ型干扰素具有抑制病毒复制、抗寄生虫、抑制多种细胞增殖、刺激免疫细胞的杀伤活性、参与免疫调节、抗肿瘤等作用。Ⅱ型和III型干扰素包括IFN-γ，IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28a)和IFN-λ3(IL-28b)。人们已发现，干扰素具有抗病毒、调节免疫系统、抗细胞增殖等作用。

然而，尽管干扰素具有各种在癌症治疗中有益的作用，其较短的半衰期和系统毒性大大限制了它在肿瘤治疗和预防中的应用。

中国专利申请CN200880117225.8中提供了一种将干扰素附着于肿瘤特异性抗体C端的融合蛋白，其被用于杀死肿瘤细胞或抑制其增殖。然而，此种融合蛋白在体内环境中不稳定，并且其表达产量不高，并不适合用于大规模工业生产。

发明内容

在一个方面，本发明提供了一种异二聚体蛋白，其包含第一多肽和不同于所述第一多肽的第二多肽，所述第一多肽包含能够结合肿瘤相关抗原的靶向部分和/或能够结合癌细胞表面标记物或癌细胞相关标记物的靶向部分，所述第二多肽包含免疫球蛋白的Fc区和干扰素。

在另外的方面，本发明提供制备异二聚体蛋白的方法，所述方法包括下列步骤：

1)提供第一多肽，其包含能够结合肿瘤相关抗原的靶向部分和/或能够结合癌细胞表面标记物或癌细胞相关标记物的靶向部分；

2)提供第二多肽，其包含免疫球蛋白的Fc区和干扰素；以及

3)获得所述异二聚体蛋白。

任选地，所述方法还包括分离和纯化所述异二聚体蛋白的步骤。

在具体的实施方式中，可选地，在本发明的异二聚体蛋白的第二多肽中，所述免疫球蛋白的Fc区和所述干扰素是化学偶联的，例如是通过连接子相连的。所述连接子可以为多肽，其可包含几个至几十个氨基酸，例如所述连接子可包含1-10个氨基酸，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸，如1-15(如1-11、12、13、14、15)个氨基酸，1-20个氨基酸，1-30个或更多个氨基酸。在具体的实施方式中，所述连接子可包含SEQ ID NO:27中所示的氨基酸序列。在具体的实施方式中，所述连接子可以是抗蛋白质水解或者基本上抗蛋白质水解的连接子。

在本发明的所述异二聚体蛋白中，所述干扰素选自I型干扰素、II型干扰素和/或III型干扰素，例如干扰素α，干扰素β和/或干扰素λ。特别地，所述干扰素可以是小鼠干扰素β、人干扰素β、小鼠干扰素α4、人干扰素α2或人干扰素λ。