[发明专利]用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物检测的培养基，尤其涉及一种用于检测大肠杆菌O157:H7的显色培养基。

背景技术

出血性大肠杆菌(enterohemorrhage E.Coli，EHEC)是大肠杆菌的一个亚型，EHEC分为157、26、111血清型，主要致病菌株为O157:H7，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。

EHEC O157:H7除不发酵或迟缓发酵山梨醇外，其他常见的生化特征与大肠埃希氏菌基本相似，但也有某些生化反应不完全一致，具有鉴别意义。EHECO157:H7虽然有uidA基因，但其编码的β-葡萄糖醛酸酶无活性，不能分解4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MUG)产生荧光，即MUG阴性。

EHEC O157:H7的显色培养基利用原理为大肠杆菌O157:H7不发酵或2天内不发酵山梨醇以及表达β-半乳糖苷酶，在基础培养基中添加山梨醇和β-半乳糖苷酶的显色底物；在这种显色培养基中，大肠杆菌菌落显示发酵山梨醇的色泽，而EHEC O157:H7呈现β-半乳糖苷酶显色底物中显色基团的颜色。

研究发现，大肠杆菌中存在不发酵山梨醇，β-葡萄糖醛酸酶阳性，但EHECO157:H7血清也不凝集的菌株，给EHEC O157:H7的显色培养造成假阳性。目前，还没有将用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基。

本发明的所采用的技术方案为：

一种用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基，每1000mL培养基含有琼脂15-20g、蛋白胨5-15g、酵母提取物4-6g、氯化钠5-10g，还含有山梨醇10-20g、肌醇4-7g、性红0.005-0.03g、β-半乳糖苷酶显色底物0.05-3g、4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸0.1-0.2g、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷0.05-0.2g，牛胆盐1-5g、亚碲酸钾1-5mg、头孢克肟0.01-0.06mg。

优选的，β-半乳糖苷酶显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖。

优选的，β-半乳糖苷酶显色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖在1000mL培养基中的含量为0.1g。

优选的，β-半乳糖苷酶显色底物为邻硝基苯-β-D-半乳糖苷。

优选的，β-半乳糖苷酶显色底物邻硝基苯-β-D-半乳糖苷在1000mL培养基中的含量为2g。

优选的，4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸在1000mL培养基中的含量为0.05-0.2g。

优选的，4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸在1000mL培养基中的含量为0.15g。

优选的，4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸在1000mL培养基中的含量为0.1g。

优选的，用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基，每1000mL培养基含有琼脂15g、蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠5g，山梨醇15g、肌醇5g、性红0.01g、邻硝基苯-β-D-半乳糖苷2g、4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸0.1g、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷0.1g、牛胆盐1.5g、亚碲酸钾2mg、头孢克肟0.04mg。

优选的，用于检测大肠杆菌O157：H7的显色培养基，每1000mL培养基含有琼脂15g、蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠5g，山梨醇15g、肌醇5g、性红0.01g、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖0.1g、4-甲基扇型酮-β-D-葡萄糖苷酸0.1g、异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷0.1g、牛胆盐1.5g、亚碲酸钾2mg、头孢克肟0.04mg。

本发明在培养基中添加了山梨醇和中性红，除大肠杆菌O157：H7外的大肠菌群发酵山梨醇产酸，在pH指示剂中性红作用下显示出红色色泽，而大肠杆菌O157：H7不利用山梨醇而呈现无色菌落。

本发明在培养基中添加了β-半乳糖苷酶显色底物Ⅰ和β-半乳糖苷酶显色底物Ⅱ，大肠菌群在β-半乳糖苷酶作用下分解底物，游离出显色剂，使菌落呈现出显色剂的色泽。

胆盐可抑制样品中大部分的革兰氏阳性球菌，包括牛胆盐、猪胆盐、三号胆盐、去氧胆酸钠和混合胆盐。本发明在培养基中添加了胆盐。

本发明在培养基中添加了，可抑制样品中部分的革兰氏阴性杆菌如大肠菌群以及容易扩散生长的变型杆菌的抗生素亚碲酸钾和头孢克肟。