[发明专利]同时检测庆大霉素和喹诺酮类药物的量子点免疫荧光试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种同时检测动物源性食品中庆大霉素 和喹诺酮类药物残留的量子点免疫荧光试剂盒。

背景技术

庆大霉素（Gentamycin，GM），是氨基糖苷类抗生素的一种，庆大霉素呈碱性、易溶 于水、性状稳定，与硫酸结合成临床上使用的硫酸庆大霉素。它的抗菌谱较广，对绿脓杆菌、 大肠杆菌、产气杆菌、克雷白杆菌、奇异变形杆菌、某些吲哚变形杆菌、某些奈瑟菌、某些无 色素雷杆菌和志贺菌等革兰氏阴性菌有抗菌作用，而且对革兰氏阳性菌中的金黄色葡萄球 菌也有很强的抗菌作用；其抗菌作用机理是直接与30S核糖体亚单位16rRNA的解码区的A部 位结合，从而导致菌体死亡。但是，随着庆大霉素的广泛使用，一些细菌逐渐对其产生了耐 药性。虽然庆大霉素对奶牛乳房炎、子宫内膜炎等有很好的疗效，常用作兽医临床治疗及饲 料药物添加剂，但不规范用药会引起畜产品，尤其是泌乳动物的乳汁中有药物残留，对人类 的健康构成潜在危害，造成耳毒性和肾脏毒性。国内外相继规定了其在动物性食品中的最 高残留限量。我国农业部235号公告规定，庆大霉素在肌肉、脂肪中的最高残留限量为 100ppb，在肝中的最高残留限量为2000ppb，在肾中的最高残留限量为5000ppb，在牛奶中的 最高残留限量为200ppb。

喹诺酮类（Quinolones，QNs），是一类人工合成的含4-喹诺酮基本结构，对细菌DNA 螺旋酶具有选择性抑制的抗生素。1962年最早的喹诺酮类药物萘啶酸首先用于临床，由于 其抗菌谱窄、口服吸收差、副作用高等原因现在已很少使用。当前应用的喹诺酮大多为含有 氟原子的氟喹诺酮类。这类药物抗菌谱广，对革兰氏染色呈阴性杆菌活性较高，对其他抗生 素耐药的德细菌也具有良好的抗菌作用，无交叉耐药性；在体内分布广，体内和组织中药物 浓度高；口服吸收好，半衰期长，使用方便；与头孢菌素类药物相比，抗菌作用相似，但价格 便宜。目前在兽医临床上常用的药物主要有诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉 沙星、氟甲喹等十几种，随着应用的增加，其各种毒副作用也逐渐显现出来，主要体现在头 晕、低血糖、恶心、胃肠道症状、中枢神经系统和过敏反应。特别是近几年，严重的不良反应 发生率约为1.6%~1.8%，引起了全世界的关注。为了保障动物源性食品的安全，欧盟、美国及 我国等很多国家都对喹诺酮类药物在动物源性食品中残留制定了最大残留限量（MRL）。我 国农业部文件（农质发[2009]3号文件）中规定了2009年我国畜禽产品监测项目，禽肉中4种 喹诺酮类药物残留是重要的监测项目之一。

现有的庆大霉素和喹诺酮类药物检测方法多为色谱法，但是这些方法的灵敏度受 样品的净化、浓缩等步骤的影响较大，再者这些方法需要复杂的仪器，过程繁琐，不适应现 场大量样本的筛查，且目前现有的快速检测产品存在一定的局限性，无法同时检测庆大霉 素和喹诺酮类药物的残留。量子点免疫荧光检测方法具有特异性强、稳定快速、检测范围 宽、操作简单自动化程度高、试剂稳定且有效期长(6~18个月)等优点，其检测限比ELISA和 理化检测方法高。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时检测庆大霉素和喹诺酮类药物的量子点免疫荧光 试剂盒，包括包被原、量子点标记的抗体；

所述包被原为庆大霉素半抗原与载体蛋白的偶联物和喹诺酮药物半抗原与载体蛋白 的偶联物的混合物；

所述的庆大霉素半抗原，为式Ⅰ所示的化合物；

式Ⅰ。

所述的喹诺酮药物半抗原，为式Ⅱ所示的化合物；

式Ⅱ。

本发明还公开了式Ⅱ所示化合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）称取环丙沙星33.3mg，溶于1.5mL去离子水中，用1M氢氧化钠溶液调pH9.0；

（2）冰浴中加入乙二醇二缩水甘油醚20μL，室温搅拌反应4h，混合液真空干燥，得到的 固体即为产物。

本发明提供的庆大霉素抗原，是将式Ⅰ所示化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物。

常用载体蛋白均可采用，如牛血清白蛋白(BSA)，卵清蛋白(OVA)，人血清白蛋白 （HSA），鼠血清白蛋白（MSA），甲状腺蛋白（TG）或血蓝蛋白（KLH）等，庆大霉素与BSA的摩尔结 合比具体可为8:1。

本发明还公开了所述庆大霉素抗原制备的方法，包括如下步骤：