[发明专利]酸枣内生解淀粉芽孢杆菌新菌株SZ23及发酵液的制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物内生细菌的利用领域，具体地说是涉及一种酸枣内生解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）新菌株SZ23及发酵液的制备方法和应用。

背景技术

植物内生细菌(endophytic bacteria)是生存在植物细胞内或细胞间隙的细菌，它能够与其建立和谐关系。植物内生细菌不会引起植物的表型特征或功能发生变化。Paestur在1876年从葡萄中获得内生细菌后人们才真正开始了植物内生细菌的研究。1992年Kleopper第一次提出“植物内生细菌”(endophytic bacteria)的概念，使得植物学家、微生物学家和微生态学家对其进行了大量的研究。目前研究已经证实内生细菌存在于健康植物体内，还具有各种生物学作用，如促生、固氮、防治病虫害和降解重金属等。利用内生细菌防治植物病害的研究也是生物防治的热点之一。

内生细菌已成为植物微生态系统中的重要组成部分之一，内生细菌能够增强植物对恶劣环境的适应能力，改善系统生态平衡，保持寄主植物健康生长。利用内生细菌作为生防因子具有很大优势，体现在以下几个方面：（1）植物内生细菌在植物组织中不仅获得充足营养，而且通过植物组织保护，不会受外界环境如高温、干旱、强光等影响，具有稳定的生存环境，易于发挥其生物防治作用。（2）在植物被病原因子侵入后，无论易感植株或抗病植株，都会产生抗生素、植保素等抗菌物质提高自身免疫，这些抗菌物质会对土壤或植物根际的细菌有拮抗作用。而内生细菌长期寄生在植物体内，导致其细胞特性与腐生类细菌不同，会对植物抗菌毒性物质产生抗性，使植物的自身防卫系统不会对其造成影响，因而作为生防菌更具有优势。（3）植物内生细菌分布在植物根、茎、叶等各种器官中，方便病菌侵入后直接作用于病菌等致病因子，或产生拮抗物质运输到患病部位，或使寄主植物产生诱导抗性。（4）将内生细菌的某些抗病或抗菌基因导入其他工程细菌中，通过高产代谢物作为生物农药防治病虫害，不仅对环境友好，还可避免病原菌产生抗药性。如将棉花内生细菌抗虫基因导入Bt工程菌中，通过有效发酵液制成生物农药来防治玉米茎蛀螟和棉花的蚜虫。

植物内生细菌生防作用机制主要包括产生次生代谢物、竞争生态位、诱导寄主产生系统抗性及产生胞外溶菌酶降解病原菌细胞壁等方式。其中，产生次生代谢物抑制植物病原菌生长是植物内生细菌生防机制中一个重要组成部分，目前发现内生芽孢杆菌属所产生的拮抗物质主要有三大类：（1）蛋白类。包括多肽类、几丁质酶、抗菌蛋白，已报道的部分抗菌蛋白对蛋白酶、肽酶等多种酶不敏感。（2）抗菌肽。抗菌肽分子结构一般为环状或线状，具有分子量低、水溶性好、热稳定、耐强碱性和广谱抗菌等特点，如plipastatinBl、FungicinM-4和bacillomycinD等。（3）脂肽类。脂肽类物质易溶于水，有良好的表面活性，但易被降解。另外有些芽孢杆菌还可产生多烯类、香豆素、大环内酯类、酚类物质、含有双糖的氨基糖苷类抗生素等抗菌物质。

内生细菌的筛选须考虑植物的种植年龄、生长环境、抗病虫、食用和药用价值等。种植年代越久的植物，其内生细菌的种类可能更丰富，抗病虫性强的植物内生细菌也常会分泌与寄主相似的抗菌和杀虫活性物质。

酸枣(Ziziphus acidojujuba C.Y ChengetM.J.Liu)是鼠李科(Rhamnaceae枣属Ziziphus Mill.)植物。酸枣的环境适应能力强，可在低洼盐碱及干旱裂缝中上生长，也可在高温多雨及风沙寒冷中生长。酸枣果实营养成分丰富，果仁可以入药，使用价值高，是一种绿色的健康果品。酸枣中富含糖类、有机酸及多种的维生素，其中的维生素P 具有健脑功能及维生素 E 可以促进血液循环和组织生长。酸枣仁具有静心、补肝、生津等药用价值。另外酸枣中还含有皂苷、黄酮、三萜类、生物碱类、多种脂肪酸和氨基酸等对人体有益的化学成分。因此，根据酸枣药用性及较强的环境适应性和抗病能力，以内生细菌的研究技术为基础，对酸枣的内生细菌进行分离、筛选、鉴定，并对其抗菌活性物质产生条件及抗菌物质分离纯化等方面进行研究。该研究对利用植物内生细菌开发新生物农药提供了理论和物质基础。

发明内容

本发明的目的是提供酸枣内生解淀粉芽孢杆菌新菌株SZ23及发酵液的制备方法。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的。