[发明专利]一种抗干扰单组份酶底物显色试剂

说明书

技术领域

本发明涉及酶底物显色试剂领域，具体地，涉及一种抗干扰单组份酶底物显色试剂。

背景技术

  酶底物即TMB，用于ELISA反应。底物产生一种可溶性淡蓝色的末端产物，可在370或635nm在分光光度计上读取。其适用于酶联免疫反应中的显色阶段的定量和定性分析。其检验的原理是：当标记在抗体或抗原上的酶与显色液中的酶底物、双氧水等反应，加入终止液后溶液由无色变成黄色，黄色深浅反应ELISA体系中抗原抗体结合的多少，从而判断某种抗原或抗体的多少。在通过酶标仪测度吸光值，判断免疫反应的程度。

现有市售的酶联免疫试剂盒所采用酶底物显色剂液大多为双组份，分A液和B液，使用之前需要先混匀，在使用上存在缺点一是不够方便，二是在包装材料上存在成本提高和资源浪费；三是使用中的混合过程容易造成批间质量不均一；四是还存在稳定性差、保存时间短、显色背景高、灵敏度低等的缺点。

现有技术的酶底物显色试剂及其制备方法，由A液和B液等体积混合后得到，所述A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氢二钠0.01-0.5mol/L，过氧化氢0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括酶底物、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底物的摩尔浓度为0.1-1mmol/L，所述HCl的摩尔浓度为0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1-10%。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，以克服现有显色液显色背景高、稳定性差、灵敏度低的问题。

此外，本发明还包括上述抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml， 酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为4.0-6.0。

现有的酶底物显色试剂为双组份显色液，在使用前需要将两种组分混匀后才能进行显色测试，该过程不仅浪费时间，操作麻烦，且会导致在混合两种组分时显色液的有效成分挥发，从而导致酶底物显色试剂的灵敏度降低；且现有的显色液没有对其pH进行限定，使得现有显色液在显色过程中显色背景较高，且稳定性差；本发明将酶底物显色试剂设置为单组份，且将其显色液的pH值设置为4.0-6.0，此外，本发明的抗干扰单组份酶底物显色试剂中将传统的过氧化氢过氧化脲替换成过硼酸钠，其具有更好的氧化性。

实验证明，抗干扰单组份酶底物显色试剂在pH置为4.0-6.0之间具有较好的稳定性，且在显色过程中具有显小的显色背景。

进一步地，PH值为4.5-5.0。

实验证明，酶底物显色试剂在pH置为4.5-5.0为抗干扰单组份酶底物显色试剂稳定性最好的pH值，且具有最小的显色背景。

进一步地，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。

实验证明，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的抗干扰单组份酶底物显色试剂具有更好的稳定性。

进一步地，酶底物的质量设置为10-30mg。

将酶底物的质量设置为10-30mg能有效的提高显色效果，提高显色的灵敏度。

一种抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用，将所述的单组份酶底物显色试剂应用到酶联免疫试剂盒。

综上，本发明的有益效果是：

1、通过将本发明所述范围内的抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段，避免了酶底物显色试剂在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，简化操作流程，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果；避免了酶底物显色试剂的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了酶底物显色试剂的灵敏度

2、通过将抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH设置为4.0-6.0，使抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段时，具有较好的稳定性、且具有较小的显色背景。

具体实施方式

下面结合实施例，对发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：