[发明专利]一种具有抑菌活性的长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)重组蛋白的应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种具有抑菌活性的长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)的应用。

背景技术

长牡蛎是一种重要的海水养殖贝类，在中国沿海均有分布。牡蛎养殖业在我国沿海经济社会发展中占据举足轻重的地位，并具有巨大的发展前景。由于各种微生物引起的多种疾病在长牡蛎的养殖群体中不断爆发，造成了巨大的经济损失。因此，对长牡蛎开展免疫防御机制研究将有助于人类对其病害进行有效防控和治疗。

长牡蛎作为软体动物的代表，以其特殊的进化地位，得到人们越来越多的关注。由于缺乏适应性免疫防御系统，长牡蛎主要依赖固有免疫系统抵御外源病原微生物的侵染。海洋环境中存在着大量的微生物群，宿主识别有害非己成分的能力显得尤为重要。C型凝集素作为一类重要的模式识别受体，能够识别表达在微生物细胞表面的病原相关分子模式，在固有免疫应答中发挥不可或缺的作用。

C型凝集素是一类包含有糖类识别结构域(CRD)并且以钙离子依赖的形式识别并结合糖类的蛋白。1860年，研究人员报道了蛇毒凝集素的凝集活性。随着对C型凝集素的深入研究，越来越多的证据表明，C型凝集素不仅作为模式识别分子在固有免疫应答反应中起作用，同时也作为效应分子抵御病原微生物的入侵。它不仅可以识别并结合入侵病原，并且具有促吞噬，结节形成及激活补体等功能。C型凝集素的抑菌活性首先在小鼠中发现，随后文昌鱼中也有类似报道。

发明内容

本发明的在于提供一种具有抑菌活性的长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)重组蛋白的应用。

为实现上述目的本发明采用的技术方案为：

一种具有抑菌活性的长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)重组蛋白的应用，长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)基因用于制备抑菌剂或饲料添加剂。

所述长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)基因用于制备抑制抗金黄色葡萄球菌的抑菌剂。

所述长牡蛎C型凝集素-2(CgCLec-2)基因为序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列所示。

制备方法：

(1)用特定引物P1和P2对长牡蛎C型凝集素CgCLec-2编码区片段进行扩增；

P1：5’-CGCGGATCCATGGATACAGAAGTGACCTCAT-3’

P2：5’-CCCAAGCTTCTATAAAGTTTGTTCACAGATG-3’

(2)采用BamH I和HindⅢ对上述的重组子及pET32a载体进行酶切,酶切片段通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；

(3)将上述构建重组子转入Transetta DE3表达菌株中进行诱导培养，而后纯化，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白CgCLec-2。本发明所具有的优点：

本发明中体外重组表达的长牡蛎凝集素-2(CgCLec-2)蛋白对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌有抑制生长作用，作为一种有效的模式识别受体，在开发抗菌类药物、新型免疫制剂以及饲料添加剂等方面具有潜在应用价值。

附图说明

图1为本发明实时例提供的长牡蛎重组蛋白rCgCLec-2以钙离子依赖的形式识别并结合PAMPs。

图2为本发明实施例提供的长牡蛎重组蛋白rCgCLec-2对金黄色葡萄球菌生长的影响。

具体实施方式

下面的实验例中将对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。

实施例1

长牡蛎凝集素-2(CgCLec-2)基因编码区的体外原核重组表达，包括下列步骤：

1、重组载体的构建

本发明中采用的重组载体为pET-32a原核表达载体。

通过PCR技术，采用5’末端分别添加了Bam H I和Hind Ⅲ特定酶切位点的基因特异性引物，对长牡蛎C型凝集素CgCLec-2编码区片段进行扩增：

基因特异性引物为：

P1(5’-CGCGGATCCATGGATACAGAAGTGACCTCAT-3’)：

P2(5’-CCCAAGCTTCTATAAAGTTTGTTCACAGATG-3’)，