[发明专利]一种西尼罗病毒单克隆抗体及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术，涉及一种西尼罗病毒单克隆抗体及试剂盒。

背景技术

西尼罗病毒(West Nile Virus,WNV)属于黄病毒科黄病毒属的虫媒病毒，通过蚊子的叮咬感染人、鸟、马、家禽等多种动物。1999年前，西尼罗病主要分布在非洲、中东、欧洲、西亚/中亚，1999年后，主要分布在北美，是一种严重威胁人类健康的病毒性传染病，成为全球公共卫生安全问题的关注点。该病严重感染病例能引起致死性脑膜炎或脑炎。2012年美国38个州报告了人类感染案例，至少有1118个案例报告，其中41个死亡报告。

鸟类是西尼罗病毒的自然贮藏宿主，传染源主要为鸟类和处于病毒血症期的带毒动物。蚊子叮咬是该病传播的最主要途径。蚊子通过交叉叮咬传染源和易感动物而传播该病，鸟类的迁徙也可导致该病的扩散。到目前为止，我国还没有发现西尼罗病毒感染病例，也没有在动物体内发现西尼罗病毒。但是，我国有很多地方夏天潮湿、炎热，一些地方洪水泛滥，具备蚊虫大量滋生的条件；而且与我国相邻的俄罗斯和中/西亚多国均出现过该病疫情，随着中国与世界其他国家之间的贸易、旅游、人员往来日益频繁，和鸟类迁徙的影响，我国仍然面对着西尼罗病毒的威胁。目前尚无针对西尼罗病毒的特效治疗药物，早期发现和及时扑灭疫情是控制西尼罗病毒传播的主要措施。因此，我国需要有效的WNV检测试剂盒检测方法，建立WNV检测体系，以防止西尼罗病毒的传入和流行。

西尼罗病毒的检测可以用敏感的细胞进行病毒分离，但是分离到的病毒需要使用其他方法进行进一步鉴定，而且病毒分离所需时间长、工作量大，硬件要求和专业知识要求高，不适用于规模化、现场检测。随着分子生物学的发展与应用，运用分子生物学技术进行WNV检测的方法越来越多，尤其是基于聚合酶链式反应(PCR)的反转录(RT-)PCR，实时荧光RT-PCR。但是该方法需要昂贵且专业的仪器设备，尤其是实时荧光RT-PCR，所用耗材也价格不菲，操作也是需要经过专业培训的人员才能胜任，而且样品及操作容易出现污染而造成假阳性。而基于抗体的捕获ELISA、胶体金试纸条等方法可以快速、灵敏地检测WNV病毒，适于在监测系统中应用和现地检测。因此，目前亟需有效的WNV检测方法。

发明内容

根据上述领域的需求和不足，本发明提供一种灵敏度好、特异性强的西尼罗病毒WNV的单克隆抗体，本发明单克隆抗体可以应用于检测西尼罗病毒。

一株杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.8508，所述杂交瘤细胞株的获得是通过将重组表达的西尼罗病毒囊膜蛋白E蛋白纯化后免疫小鼠，取免疫小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合，后对上述细胞进行培养，进一步亚克隆，筛选出一株针对西尼罗病毒(WNV)的单克隆抗体，及分泌这些单克隆抗体的杂交瘤细胞，纯化并保藏。

一种西尼罗病毒单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株分泌而得。

上述单克隆抗体在检测西尼罗病毒中的应用。

一种用于检测西尼罗病毒的反应载体，其特征在于，所述反应载体上直接或间接包被有上述单克隆抗体。

一种检测西尼罗病毒的试剂盒，其特征在于，包含有上述的反应载体。所述反应载体是基于免疫反应原理的检测仪器，可以是荧光化学检测板、酶联免疫检测板等，本发明实施例优选的是酶标板。

一种检测西尼罗病毒的胶体金试剂盒，其特征在于，在金标纤维垫上包被有胶体金标记的抗WNV的单克隆抗体，即Au-McAb；检测线上包被有兔抗WNV多抗，即WNV-Pc；检测时，当样本中存在WNV，则与Au-McAb形成复合物，进而与检测线的WNV-Pc结合，显色。

本发明试剂盒可以用于鉴定西尼罗病毒，辅助鉴定待测病毒是否为西尼罗病毒以及辅助鉴定待测植物样本是否感染西尼罗病毒。

本发明提供的单克隆抗体用于检测西尼罗病毒，具有特异性好、敏感性强、效价高等优点。本发明研制的西尼罗病毒单克隆抗体可用于研制西尼罗病毒的免疫学诊断试剂，如酶联诊断试剂，胶体金免疫试纸条等。

本发明酶联免疫检测试剂盒使用双抗体夹心法检测标本中的西尼罗病毒抗原。先在试剂盒的聚乙烯微孔板条上预包被兔抗西尼罗病毒的多克隆抗体，当加入的样品中含有西尼罗病毒时，微孔中预包被的多克隆抗体能将其捕获，随后加入的酶标单克隆抗体与之结合，然后通过酶催化底物的显示程度来判断结果。当标本中不含西尼罗病毒时，底物不会显色。可检测的标本包括血液、血清、动物组织等待检测物的研磨液等。