[发明专利]抗生素产生菌Lnu‑13的发酵条件

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域。具体地涉及抗生素产生菌Lnu-13的最佳发酵培养基及发酵条件。

本发明所称的抗生素产生菌Lnu-13，命名为链霉菌Lnu-13(Streptomyces sp.lnu-13)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏单位地址，中国，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2014555。

背景技术

放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70％是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂、维生素和有机酸等。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。因此，开发新的抗生素生产菌种在医药工业及农业生物防治上有重要意义。

发明内容

抗生素是微生物的次级代谢产物,其生产水平不仅取决于菌种本身的性能，而且还受营养条件、pH值大小、温度高低、甚至发酵时间等多种因素的影响和调控，这些因素相互作用又相互制约。

本发明的目的是提供一种新的抗生素生产菌种，本发明所述的抗生素产生菌，命名为链霉菌Lnu-13(Streptomyces sp.lnu-13)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2014555。

本发明的另一目的是提供优化的抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件，为Lnu-13的工业化生产和应用提供理论基础。

本发明的链霉菌Lnu-13(Streptomyces sp.lnu-13)，是从辽宁省仙人洞国家自然保护区土壤中分离得到。将土壤样品用无菌水稀释10⁵浓度，利用高氏一号培养基，采用常规的平板划线分离法进行分离培养，挑取放线菌单菌落，编号备用，筛选而得。

1、链霉菌Lnu-13的显微形态特征

图1为Lnu-13在光学显微镜100X下的孢子丝和气生菌丝形态，形态特征：基内菌丝无横膜，不断裂；气生菌丝多分枝，孢子丝大部分为直、波曲状、钩形、小螺旋和松散的螺旋状(一般1～2圈)，孢子呈圆形、椭圆形和梭形；图2为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征

(正面)，图中显示Lnu-13在高氏一号培养基上生长良好，表面形状为棉絮状；图3为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征(反面)，图中显示菌落与培养基着生紧密，有黄色色素生成，均符合链霉菌属的特征。

2、Lnu-13生理生化特性：

纤维素水解实验、明胶液化实验、硫化氢实验、牛奶凝固与胨化实验均呈阳性；淀粉水解实验、MR实验、VP实验、色氨酸分解实验、柠檬酸盐实验、卵磷脂酶、硝酸盐还原实验均呈阴性；可利用葡萄糖、果糖、木糖、乳糖、淀粉、蔗糖、半乳糖、纤维二糖作为碳源生长，在含有葡萄糖、半乳糖和蔗糖的培养基上生长旺盛，对淀粉和纤维二糖的利用能力较差。

3、链霉菌Lnu-13的16S rDNA序列分析方法：

(1)链霉菌Lnu-13的DNA提取采用反复冻融法，以此为模板进行PCR扩增。

(2)PCR引物：正向引物BSF8/27：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′

反向引物BSR1541/1522：5′-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3′

(3)PCR引物由上海生物工程有限公司合成。

(5)PCR扩增条件：94℃5min；94℃30s，57℃30s，72℃1.5min；30个循环；72℃5min。

本发明链霉菌Lnu-13菌株，PCR产物测序由上海生物工程有限公司完成，测得的序列如SCQ ID NO.1所示，将所测得的16S rDNA序列用BLAST搜索工具从GeneBank中调出与其相关的16S rDNA序列，然后用CLASTAL X软件进行多序列比对，并采用MEGA4.1软件中的邻位相接法(Neighbor-Joining)进行系统进化树的构建与同源性比较，所构建的系统进化树见图4。结果与已报道的蓝色链霉菌(Streptomyces cyaneus)同源性达到99％，结合生理生化反应特性，鉴定抗生素产生菌Lnu-13为蓝色链霉菌属。