[发明专利]一种破伤风类毒素新型培养基的制备方法

权利要求书

1.一种破伤风类毒素新型培养基的制备方法，包括配方和制备工艺，其特征在于：所述的配方，包括新培养基配方、I号生长因子配方和II号生长因子配方；

所述新培养基配方简称基配方，所述基配方为：

原料1：蛋白胨酵母粉，药用级，14.62毫克；

原料2：胰蛋白胨，药用级，5.64毫克；

原料3：酵母粉，10克；

原料4：三水合乙酸钠CH₃COONa.3H₂O，分析纯，5克；

原料5：磷酸二氢钾KH₂PO₄，分析纯，1克；

原料6：磷酸氢二钠Na₂HPO₄，药用级，0.4克；

原料7：甘油，药用级，60毫升；

原料8：葡萄糖，分析纯，2.5克；

原料9：I号生长因子，5毫升；

原料10：II号生长因子，2毫升；

原料11：六水合三氯化铁FeCl₃.6H₂O，分析纯，0.03克；

原料12：注射用水，770毫升；

脱色剂：活性炭，药用级，2克；

中和剂：氢氧化钠NaOH溶液，20％，按需量，毫升；

稀释剂：注射用水，余量，毫升；

配方中各物质的用量为1000毫升单位容积培养基的用量；

所述I号生长因子配方简称I配方，所述I配方为：

原料A：盐酸硫胺，生化试剂，0.3g；

原料B：核黄素，生化试剂，0.3g；

原料C：盐酸吡哆辛，生化试剂，0.3g；

原料D：泛酸钙，生化试剂，1.2g；

原料E：维生素H，生化试剂，4mg

原料F：无水乙醇，分析纯，250ml；

稀释剂G：注射用水，余量，毫升；

I配方中各物质的用量为1000毫升单位容积的I号生长因子的用量；

所述II号生长因子配方简称II配方，所述II配方为：

原料a：烟酸，生化试剂，0.25g；

原料b：L-胱氨酸，生化试剂，75g；

原料c：尿嘧啶，生化试剂，2.5g；

原料d：稀盐酸，药用级，150ml；

原料e：七水合硫酸镁MgSO₄.7H₂O，分析纯，50g；

原料f：七水合硫酸锌ZnSO₄.7H₂O，分析纯，10g；

稀释剂h：注射用水，余量，毫升；

II配方中各物质的用量为1000毫升单位容积的II号生长因子的用量；

所述的制备工艺，包括I号生长因子制备、II号生长因子制备、新培养基制备；其中，

所述I号生长因子制备为，将所述I配方中原料B置于烧杯内，加入稀释剂G浸没混匀，之后，加入原料F搅拌溶解，之后，加入原料A、原料C、原料D和原料E搅拌溶解，之后，加入稀释剂G使总量至1000ml，搅拌混合均匀；获得I号生长因子，待用；

所述II号生长因子制备为，将所述II配方中的原料a、原料b和原料c置于烧杯内，加入稀释剂h浸没混匀，之后，加入原料d搅拌溶解，之后，加入原料e和原料f混合搅拌溶解，之后，加入稀释剂h使总量至1000ml，搅拌混合均匀；获得II号生长因子，待用；

所述新培养基制备为：

步骤一、将所述基配方中的原料1、原料2、原料3、原料4、原料5和原料6加入反应釜内，边搅拌边加热至50～60℃，使之充分溶解，获得初溶料；

步骤二、用烧杯从反应釜内取样20ml测定所述初溶料的pH值，用基配方中的中和剂将反应釜内初溶料的pH值调节至7.4±0.2，获得中和料；

步骤三、将基配方中的原料7投入反应釜内与所述中和料加热搅拌混合，加热温度至100℃，使之沸腾，沸腾持续时间3～5分钟，停止加热，获得含油料；

步骤四、将基配方中的所述原料8和原料12置于烧杯中搅拌溶解后投入反应釜内与所述含油料搅拌混合，搅拌混合用时1～2分钟，获得含糖料；

步骤五、将所述含糖料冷却至60℃从反应釜内取出，经板框滤器(NA12滤板)过滤后再次置于反应釜中，获得滤液；

步骤六、将基配方中的所述原料9、原料10、原料11和原料12投入反应釜中与所述滤液搅拌混合，在加热升温至60℃的温度下搅拌2分钟，获得浓液，停止加热，之后，用基配方中的所述稀释剂对所述浓液进行搅拌稀释，使总量至1000ml；静置冷却至室温，获得稀料；

步骤七、用烧杯从反应釜内取样20ml测定所述稀料的pH值，用基配方中的中和剂将反应釜内稀料的pH值调节至7.2±0.2，获得中和稀料；之后，将基配方中的脱色剂投入反应釜中对中和稀料进行搅拌脱色，搅拌脱色用时2分钟，获得脱色料；

步骤八、将所述脱色料移至贮存罐中，将贮存罐移至高压蒸汽灭菌釜内对所述脱色料进行连罐连盖的湿热灭菌，湿热灭菌时贮存罐的罐盖开启，湿热灭菌温度为112℃，湿热灭菌用时30分钟，之后，开启高压蒸汽灭菌釜，乘热封闭贮存罐的罐盖，之后，取出贮存罐，此时贮存罐内的物质即为破伤风类毒素新型培养基的成品。