[发明专利]以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法

权利要求书

1.一种以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)种植玉米、高粱、小麦和水稻，取发育不同天数的颖果进行实验；

(2)体式显微镜观察颖果的大小、形态与色泽变化，并观察胚乳组织的位置与分布变化；

(3)荧光显微镜观察颖果不同组织的荧光特性，分析其成分；

(4)光镜观察颖果与胚乳组织发育的显微结构变化；

(5)扫描电镜观察细胞壁、淀粉体、蛋白体和糊粉粒的立体形态结构与分布；

(6)透射电镜观察细胞内亚细胞结构的特征与变化。

2.如权利要求1所述的以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法，其特征在于：步骤(2)中，体式显微镜观察是将颖果纵切或横切，取纵剖面直接或经TTC和I₂-KI染色后进行体视显微镜观察。

3.如权利要求1所述的以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法，其特征在于：步骤(3)中，荧光显微镜观是将颖果徒手或采用冰冻切片机纵切，利用纤维素有自发荧光的原理，在荧光显微镜下直接观察颖果组织的荧光特性。

4.如权利要求1所述的以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法，其特征在于：步骤(4)中，光镜观察是将颖果纵切，取所要观察的部位，先用质量浓度为2.5％的戊二醛前固定3小时，然后以pH为7.2的0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗3次，再用质量浓度为0.5％的锇酸后固定3小时；以pH为7.2的0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗后，乙醇系列脱水，环氧丙烷置换，用Spurr树脂浸透与包埋；先切1μm半薄切片，用质量浓度为0.5％的甲苯胺兰-O、质量浓度为0.5％的番红或质量浓度为1％的甲基紫染色，在光镜下观察显微结构。

5.如权利要求4所述的以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法，其特征在于：步骤(6)中，透射电镜观察是在光镜观察的基础上，进一步作超薄切片，所述超薄切片的厚度为60nm；用醋酸双氧铀和柠檬酸铅进行双重染色，在透射电镜下观察切片的超微结构。

6.如权利要求1所述的以形态学方法对胚乳组织进行详细分类的研究方法，其特征在于：步骤(5)中，扫描电镜观察是将颖果用液氮处理后纵向断裂，取所要观察的部位，在2.5％戊二醛低温固定3小时后，以pH为7.2的0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗3次；乙醇系列脱水，醋酸异戊酯置换，CO₂零界点干燥；最后经过离子溅射镀金制样后，便可在扫描电镜下观察。