[发明专利]一种高活性美洲大蠊的制备方法

说明书

发明领域

本发明涉及药品制法，特别涉及一种高活性美洲大蠊的制备方法，属医药技术领域。

背景技术

美洲大镰(Periplaneta american)属昆虫纲，蜚镰科，俗称蟑螂。美洲大镰作为药用最初见于《神农本草经》，用于治血痰症、寒热、破积聚、喉咽痹、内寒无子。目前以美洲大镰为药用原料，有康复新、心脉龙、肝龙等中成药在市场销售。

中药干燥在我国有很长的历史，经干燥的中草药可保持一定的药用成分以及不易腐败变质，干燥作为保证中草药品质的重要措施，是中草药加工中一个必不可少的工艺过程，干燥与中药生产的关系密切，干燥的方法将直接影响产品的质量。现有文献美洲大镰的干燥方法，捕捉后用乙醇浸泡杀死或沸水烫死，晒干或60℃烘干。

发明内容

本发明的目的是提供一种高活性美洲大蠊的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种高活性美洲大蠊的制备方法，其特征在于：冷冻后干燥。

本发明的一种高活性美洲大蠊的制备方法，其特征在于：捕捉后用乙醇浸泡杀死或沸水烫死，冷冻后干燥。

本发明的一种高活性美洲大蠊的制备方法，其特征在于：冷冻后干燥是阴干或晒干或烘干。

本发明的一种高活性美洲大蠊的制备方法，其特征在于：冷冻是冷冻至-10℃以下冻结。

至此完成了本发明。本发明的高活性美洲大蠊，抗癌活性高。

下面通过试验例说明本发明的有益之处。下面试验例旨在进一步说明本发明的有益效果，而非本发明的限制。

一、将捕捉的同一批美洲大蠊，按以下方法进行加工。

1）乙醇杀死烘干：用乙醇浸泡杀死，60℃烘干以下烘干；

2）乙醇杀死冷冻烘干：用乙醇浸泡杀死，冷冻至-10℃至冻结，60℃烘干以下烘干；

3）沸水烫死冷冻烘干：用沸水烫死，冷冻至-10℃至冻结，60℃烘干以下烘干；

4）沸水烫死冻干：用沸水烫死，置冻干机内，冷冻至-20℃以下，抽真空至干燥室压力45Pa以下，加热升华，升华的温度应控制在40℃以下，解析阶段的温度控制在45℃以下，至干，取出，密封包装。

二、不同方法干燥的美洲大蠊抗人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562试验。

1、制备美洲大蠊提取物  分别取不同方法干燥的美洲大蠊粉碎，各加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为1.10（60℃）时，加入乙醇使含醇量达到75％，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎，得不同方法干燥的美洲大蠊提取物。

2、肿瘤细胞株　人肺源腺癌细胞SPCA-1、人肝癌细胞系HepG2和人慢性髓系白血病细胞K562，用RPMI-1649培养液, 37℃,5%CO2，相对湿度100%培养，贴壁细胞0.25%胰蛋白酶消化传代。

3、方法  MTT比色法测定提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用。取对数生长期细胞，用新鲜的RPMI-1640培养液配制成细胞悬液，悬浮细胞1×105个/ml贴壁细胞0.8×105个/ml。悬浮细胞分别加入不同浓度实验药物后接种于96孔培养板中；贴壁细胞先接种于96孔培养板中，每孔90μl24h后分别加入不同浓度实验药物。终体积为每孔100μl且每组设3个平行孔，分组:受试药组(培养液+细胞悬液+不同浓度受试药)、阴性对照组(培养液+细胞悬液)、药物颜色对照组(培养液+不同浓度受试药)、空白对照组(培养液+生理盐水)。受试药浓度依次为10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml。置37℃,5%CO2培养箱中培养72h后，向每孔加入MTT溶液10μl震荡混匀后，继续培养4h，加入SDS90μl终止培养,37℃过夜，然后室温下在微量振荡器上震荡10min，酶标仪测定570nm波长处的吸光度(OD值),实验重复3次。

按以下公式计算生长抑制率：

生长抑制率(%)=(N组OD均值-B组OD均值)—(T组OD均值-TC组OD均值)/N组OD均值-B组OD均值×100%。

4、抑制率结果见表1、表2、表3。

表1  对SPCA-1的抑制率结果