[发明专利]一种利用普朗尼克F127和甘薯茎筛选杀线虫剂的方法

说明书

技术领域

本发明属于农药筛选方法领域，具体涉及一种利用普朗尼克F127和甘薯茎筛选杀线虫剂的方法。

背景技术

植物线虫是农业生产的主要病原物之一，每年给世界农业生产造成的经济损失约1000亿美元。植物线虫的防治方法包括抗病品种、轮作、水淹、曝晒、生物防治等(Roland N.P.等.Plant Nematology，CABI Publishing.2013.)，但化学防治依然是快速、经济有效的防治方法，深受农民的青睐。

传统的杀线虫剂筛选多以秀丽小杆线虫(Caenorhabditis elegans)为测试对象，评价供试药剂对该线虫的毒力(Ohba K等.Journal of Pesticide Science,1984,9:91-96)。目前商品化的杀线虫剂均是以该筛选模式进行初筛获得的，在初筛的基础上进一步以植物寄生线虫为测试对象，分别以浸渍法、盆栽法以及田间试验等进行复筛与验证。

杀线虫剂对线虫的作用方式有多种(Kearn J等.Pesticide Biochemistry and Physiology.2014)，但由于线虫的抗逆性较强，对药剂多不敏感，一般情况下杀线虫剂对线虫的致死作用较差，杀线虫剂主要通过抑制卵孵化、抑制线虫迁移、控制线虫侵入、抑制线虫发育等复合作用来达到控制线虫的目的(邹雅新等.河北农业大学学报,2011,34(5):78-81)。浸渍法是筛选杀线虫剂的主要方法，也是我国测试杀线虫剂生物活性的标准方法(NY/T 1833.1-2009)。但浸渍法仅能够测试药剂对线虫的致死作用，而无法评价药剂对线虫卵的抑制作用、以及对线虫活动能力、侵入能力的作用，因此浸渍法会造成对线虫具有活性物质的漏筛。

普朗尼克F127(英文名称：Pluronic F127，化学式为：(C₃H₆O.C₂H₄O)x，又名嵌段式聚醚、聚醚、环氧丙烷与环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯聚氧丙烯、聚乙二醇接枝聚丙二醇、泊洛沙姆、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物、泊洛沙姆407等)在医学、制药以及化妆领域均有广泛的应用。20％～25％的普朗尼克F127在低温环境下呈液态，在常温下成半固态。由于该基质透明，线虫可在该基质内自由活动，适宜用于线虫行为研究(Ko M.P.等.Journal of Nematology,1988,20:478-485)。Ohba K等认为普朗尼克F127是适宜替代琼脂观察线虫行为的基质(Ohba K等.Journal of Pesticide Science,1984,9:91-96)；Congli等利用该基质研究番茄、拟南芥等植物对根结线虫的吸引活性(Congli W等,Nematology,2009,Vol.11(3),453-464；Ko M.P.等.Journal of Nematology,1988,20:478-485)。

经检索，没有发现利用普朗尼克F127进行杀线虫剂筛选的研究报道。

发明内容

针对现有的筛选杀线虫剂方法中存在的容易造成漏筛的问题，本发明目的在于提供一种利用普朗尼克F127和甘薯茎筛选杀线虫剂的方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种利用普朗尼克F127和甘薯茎筛选杀线虫剂的方法，包括如下步骤：

(1)、按照质量百分比为20～40％的比例将普朗尼克F127放入蒸馏水中，置于0～6℃低温下过夜溶解，得普朗尼克F127母液；

(2)、用蒸馏水将马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchus destructor thorne)配制成10～1000头/mL的液体，得线虫液；

(3)、依据待测药剂的极性用丙酮或水将待测药剂溶解，然后用水稀释为质量体积比为1～20g/L的待测药剂溶液；

(4)、用质量百分比为0.1％的吐温80对步骤(3)所得的待测药剂溶液进行梯度稀释，然后和步骤(2)所得的线虫液一起加入到步骤(1)所得的普朗尼克F127母液中，使普朗尼克F127的终浓度为18～30％(质量百分比)，使线虫液的含量为5～100条/mL；缓慢振荡混匀，并倒入9cm培养皿中，室温下放置48～72h；

(5)、在培养皿中央插入长度为0.5～2.0cm的甘薯茎段，室温下培养3～15d，然后将甘薯茎段取出，采用浅盘法分离其中的线虫，计数；以不添加药剂处理为对照；计算待测药剂的防治效果，在待测药剂的防治效果大于20％时，即说明待测药剂在该测试浓度下对线虫具有活性；