[发明专利]一种从次等紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法在审
| 申请号： | 201410697186.0 | 申请日： | 2014-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN104447967A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 王广策;牛建峰;冯建华;何林文 | 申请（专利权）人： | 南通中国科学院海洋研究所海洋科学与技术研究发展中心;中国科学院海洋研究所 |
| 主分类号： | C07K14/405 | 分类号： | C07K14/405;C07K1/18;C07K1/16;C08B37/00 |
| 代理公司： | 苏州华博知识产权代理有限公司 32232 | 代理人： | 何蔚 |
| 地址： | 226004 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 次等 紫菜 同时 提取 蛋白 硫酸 多糖 方法 | ||
1.一种从次等紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，从新鲜次等紫菜中先提取藻红蛋白，再从提取了藻红蛋白的残渣中提取紫菜硫酸多糖，一次提取过程中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖。
2.按权利要求1所述的从次等紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，具体步骤如下：
A.藻红蛋白提取
(1)将新鲜次等紫菜切碎，放入1％磷酸盐缓冲液使其细胞溶胀破裂；
(2)离心，收集上清液，得到藻红蛋白粗提液，加入固体硫酸铵至终浓度为0.5M；
(3)将藻红蛋白粗提液泵入Phenyl-Sepharose柱，清洗去除杂蛋白；
(4)依次用硫酸铵溶液、蒸馏水从Phenyl-Sepharose柱洗脱藻红蛋白；
(5)将步骤(4)中所得的洗脱液分别加入DEAE-Sepharose离子交换柱，先分别用50mM、100mM磷酸盐缓冲液、10mM醋酸钠、4mM醋酸洗柱，然后用含NaCl的磷酸盐缓冲液洗脱，即得纯化的藻红蛋白；
B.从残渣中提取紫菜硫酸多糖
(1)利用提取藻红蛋白后剩余的残渣，在10倍体积1％磷酸盐缓冲液、pH6.0酸度下，控制温度在110～121℃，提取1小时，纱布过滤；向滤渣中加入5倍体积的1％磷酸盐缓冲液，重复上述操作，再次进行提取、过滤；然后合并两次滤液，得到多糖粗提液；将多糖粗提液旋转蒸发浓缩；
(2)向浓缩后的多糖粗提液中加入乙醇，收集沉淀，冷冻干燥，得到紫菜硫酸多糖干粉。
3.按权利要求2所述的一种从紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步骤A(2)中的离心是在转速为9000～11000g、温度为5～10℃条件下离心10分钟。
4.按权利要求2所述的一种从紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步骤A(4)是依次用0.20、0.10、0.05M硫酸铵溶液、蒸馏水以3～5ml/min的速度从Phenyl-Sepharose柱洗脱藻红蛋白。
5.按权利要求2所述的从紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步骤A(5)中所述的用含NaCl的磷酸盐缓冲液洗脱，是依次用含0.15M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液、含0.20M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液、含0.2M NaCl的100mM磷酸盐缓冲液洗脱。
6.按权利要求2所述的一种从紫菜中同时提取藻红蛋白和紫菜硫酸多糖的方法，其特征在于，步骤B(2)是加入4倍体积的乙醇进行沉淀。
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