[发明专利]骨肉瘤的生物标记物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物检测技术领域，具体涉及一种骨肉瘤的生物标记物及其应用。

背景技术

骨肉瘤是骨恶性肿瘤中最多见的一种，是从间质细胞系发展而来，肿瘤迅速生长是由于肿瘤经软骨阶段直接或间接形成肿瘤骨样组织和骨组织。下肢负重骨在外界因素(如病毒)的作用下，使细胞突变，可能与骨肉瘤形成有关。

现有在骨肉瘤影响预后的因素关键在于早诊断，术后血清碱性磷酸酶增加的变化观察。现有的诊断均基于早期发现血液中骨源性碱性磷酸酶增高，与该肿瘤的成骨作用有关而进行；检测的手段多采用Gomori钙钴法、偶氮偶联法、碱性磷酸酶染色试剂盒法，检测骨源性碱性磷酸酶的表达水平。但是，酶的表达依然存在滞后性，且检测时酶的含量会随着组织分离出现变化，而与原始基体中的表达的含量有差异，而无法最真实准确地反应骨肉瘤的情况。

发明内容

本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种骨肉瘤的生物标记物novel-miR-14及其应用。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

一种骨肉瘤的生物标记物，所述生物标记物为具有序列表SEQ.ID.No.1碱基序列的novel-miR-14。

本发明的生物标记物novel-miR-14，其相比现有的其它的骨肉瘤诊断的生理指标上，其可以在更早的时间获得骨肉瘤病变是否发生，且其还能根据novel-miR-14表达的水平，评估骨肉瘤的恶性程度，具有更好的时间优势和准确性。

本发明进一步提出一种上述骨肉瘤的生物标记物在骨肉瘤检测中的应用。采用本发明的上述应用基于方法基于novel-miR-14表达水平进行，其表达含量可以用于骨肉瘤的诊断分析，通过检测出于基因的突变和病变伊始，基于novel-miR-14表达水平的检测可以利于骨肉瘤更早的发现；且检测的结果更具准确性。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1为本发明实施例检测的骨肉瘤组织和正常组织的novel-miR-14表达水平结果对照图；

图2为本发明实施例检测的骨肉瘤组织的不同恶性程度中novel-miR-14表达水平对照图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例提供一种用于骨肉瘤诊断的生物标记物，其为具有序列表SEQ.ID.No.1碱基序列的novel-miR-14。

同时，基于上述生物标记物，本发明进一步还提出一种上述骨肉瘤诊断的生物标记物在骨肉瘤诊断中的应用。其具体的应用比如可以针对该生物标记物作为骨肉瘤的生理参数指标辅助诊断，具体实现可以采用如下步骤：

S10，获取待测组织标样；

S20，提取待测标样的RNA；

S30，通过RT-PCR检测待测标样的RNA中的novel-miR-14表达水平。

本发明的上述方法基于novel-miR-14表达水平的差异进行；其中novel-miR-14具有序列表SEQ.ID.No.1碱基序列。

在本发明中，之前先通过生物信息学分析获取到了一些候选miRNA与骨肉瘤表达的潜在靶基因相关，同时进一步在对候选miRNA进行筛选，筛选过程中以miRNA预测的基础数据包括通过小RNA分类注释后未注释到任何数据库的但可以比对到基因组的序列、比对到内含子区域的序列以及比对到外显子反义链的数据为基础，然后以下述条件进一步进行精确筛选：

(1)候选的miRNA在基因组上的前体序列可以形成颈环结构，并且其成熟体序列位于前体的臂上；

(2)前体折叠后miRNA/miRNA*复合体两端有2nt的悬挂；

(3)前体臂上无较大的泡，同时没有较多的凸起；

(4)前体折叠后总体的最小自由能应不大于-18kcal/mol；

(5)预测到前体的成熟体序列的比对结果中最小支持数应大于等于5。

预测到的新的miRNA表达谱构建，针对预测到的miRNA其表达量的计算是根据比对结果，序列与成熟体序列在两端不超过3nt的错配，中间需完全匹配，符合这样条件的序列的表达量加和作为该miRNA的表达量，之后确定骨肉瘤的分子生物标记物novel-miR-14。