[发明专利]一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201410704691.3 | 申请日： | 2014-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN105693852A | 公开（公告）日： | 2016-06-22 |
| 发明（设计）人： | 方端 | 申请（专利权）人： | 方端 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569 |
| 代理公司： | 汕头市南粤专利商标事务所(特殊普通合伙) 44301 | 代理人： | 余建国 |
| 地址： | 515000 广东省汕*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 尼罗河 病毒 prem 融合 蛋白 特异性 单克隆抗体 制备 方法 应用 | ||
1.一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：preM/EⅢ融合蛋白构建及纯化、动物免疫、细胞融合和杂交瘤细胞株筛选、小鼠腹水制备以及单克隆抗体的纯化。
2.根据权利要求1所述的一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：preM/EⅢ融合蛋白构建及纯化包括用HindⅢ、BamHI双酶切pET28a和preM/EⅢ，T4连接酶连接过夜，连接产物转化DH5a，获得重组质粒。
3.测序鉴定正确的重组质粒转化BL21(DE3)，经IPTG诱导后，运用SDS-PAGE、Westemblot分析鉴定表达产物，并采用Ni离子亲和层析法纯化preM/EⅢ，作为免疫抗原。
4.根据权利要求1所述的一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：动物免疫采用雌性Balb/c小鼠。
5.根据权利要求1所述的一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：细胞融合和杂交瘤细胞株筛选，采用间接ELlSA对杂交瘤细胞进行筛选。
6.筛选呈阳性的杂交瘤细胞按照有限稀释法得到稳定分泌抗preM/EⅢ融合蛋白的单克隆抗体的亚克隆。
7.根据权利要求1所述的一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备方法，其特征在于：小鼠腹水制备以及单克隆抗体的纯化，离心后上清采用ProteinGSepharose亲和层析柱进行纯化。
8.一种西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体在制备临床检测试剂的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于方端，未经方端许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410704691.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种肝素钠的制备方法
- 下一篇：一种蝇蛆多肽的制备方法
