[发明专利]人羊膜间充质干细胞外泌体的用途

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体涉及干细胞外泌体的新用途，尤其是人羊膜间充质干细胞外泌体的新用途。

背景技术

外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小均一，直径为40～100nm，密度1.10～1.18g/ml的囊泡样小体。外泌体的应用主要集中在临床诊断及抗肿瘤方面。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是具有自我更新和多向分化能力的细胞，产生并释放营养性物质，通过旁分泌途径促进细胞修复及血管生成，在再生医学领域有重要作用。Lai等通过质谱技术分析发现:MSCs的外泌体中含有丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)人乳脂肪球EGF因子蛋白(milkfat globule-EGFfactor8protein，MFGE8)及跨膜四蛋白等857种蛋白质，它们参与细胞结构的维持运动信息交流以及组织的修复与再生。许多的研究表明MSCs外泌体在治疗组织损伤性疾病中具有重要的作用。

目前还没有人羊膜间充质干细胞外泌体在美容护肤品中的应用。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于针对现有技术存在的问题，提供人羊膜间充质干细胞外泌体在美容护肤品中的应用。

本发明采用MTT法测定人羊膜间充质干细胞外泌体对人真皮成纤维细胞生长的影响，结果显示人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉在浓度≦400μg/ml时对HDF细胞无明显的抑制作用，镜下观察细胞也无明显的死亡等症状。实验组的细胞存活率与对照组相比较，都没有出现显著的细胞死亡，而≦100μg/ml人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉能够促进HDF细胞的生长。

本发明还检测了人羊膜间充质干细胞外泌体对紫外损伤人真皮成纤维细胞的保护作用，结果显示，人羊膜间充质干细胞外泌体无论是20μg/ml，还是10μg/ml都在不同程度上提高了细胞内SOD酶的活性，可以减少因紫外线辐射诱导产生的氧自由基对细胞的攻击和损害，降低细胞的死亡率。

由此可见，人羊膜间充质干细胞外泌体具有抗光老化的功效。

进一步，本发明进行了光毒性试验结果显示涂抹人羊膜间充质干细胞外泌体后1h、24h、48h和72h均未观察到皮肤刺激反应，表明所述人羊膜间充质干细胞外泌体无光毒性作用。

因此本发明提供了人羊膜间充质干细胞外泌体在制备抗老化的制剂中的应用。

其中，所述制剂可以为药品或护肤品。

所述药品可以本领域公知的外用制剂，如搽剂、软膏剂、乳剂、糊剂、膜剂、涂膜剂、凝胶剂、气雾剂、喷雾剂、贴剂等等。所述护肤品可以本领域公知的类型，如面霜，乳液、精华液、面膜、眼霜、原液等等。

本发明还提供了一种抗老化的制剂，包含人羊膜间充质干细胞外泌体。

在一些实施方案中，所述人羊膜间充质干细胞外泌体为人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉。人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉更加便于储存、运输与应用。

在一些实施方案中，所述人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的制备方法为：取人羊膜间充质干细胞外泌体，加入海藻糖混匀后，滤膜过滤，分装后超低温冷冻12h，然后在10Pa的真空度、-50℃的条件下冷冻12h～48h。

在一些优选实施方案中，所述海藻糖的加入量为至海藻糖终浓度为10wt％。

在一些优选实施方案中，所述滤膜孔径为0.22μm。

在一些优选实施方案中，所述超低温为-80℃。

在一些实施方案中，本发明所述抗老化的制剂为护肤品。

本发明还提供了一种抗老化的润肤霜，包括人羊膜间充质干细胞外泌体和基质，所述基质包括乳化剂、增溶剂、抗结剂、润滑剂、润肤剂、稳定剂、溶剂、防腐剂。

在一些实施方案中，所述乳化剂选自ZY-92、ZY-921、白油、硬脂酸、汉生胶、三乙醇胺中的一种或几种。

在一些实施方案中，所述增溶剂选自C16-18OH中的一种或几种。

在一些实施方案中，所述抗结剂为BTH。

在一些实施方案中，所述润滑剂为DC-200。

在一些实施方案中，所述润肤剂为甘油。

在一些实施方案中，所述防腐剂为极美。

在一些实施方案中，所述稳定剂为乙二胺四乙酸二钠、0.01M磷酸盐缓冲液。

在一些实施方案中，所述溶剂为水。

在一些实施方案中，所述抗老化的润肤霜由如下重量份原料制成：