[发明专利]一种促进奶山羊精原干细胞的自我更新和增殖的载体及其应用

权利要求书

1.一种促进奶山羊精原干细胞的自我更新和增殖的载体，其特征在于，是包含奶山羊gSirt1基因的真核表达载体；所述的奶山羊gSirt1基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；

所述的真核表达载体为pSirt1-IRES2-AcGFP，将奶山羊gSirt1基因克隆到pIRES2-AcGFP表达载体中，其中gSirt1和AcGFP通过IRES2相连接，构成双顺反子；

该真核表达载体转染奶山羊精原干细胞后，使其gSirt1基因过表达或超表达。

2.如权利要求1所述的促进奶山羊精原干细胞的自我更新和增殖的载体，其特征在于，所述的真核表达载体上还设有抗生素筛选基因和标记基因。

3.权利要求1所述的促进奶山羊精原干细胞的自我更新和增殖的载体在促进离体环境培养下的奶山羊精原干细胞的自我更新、维持多能性和增殖中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的真核表达载体转染奶山羊精原干细胞后gSirt1基因过表达或超表达，并上调与自我更新和多能性相关基因的表达，上调细胞增殖相关基因和细胞周期蛋白的表达。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的自我更新和多能性相关基因包括Oct4和Plzf，所述的细胞增殖相关基因包括Myc和PCNA，细胞周期蛋白为CCNA1。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的真核表达载体转染奶山羊精原干细胞后促使其进入细胞周期的S期，加快细胞增殖。

7.一种促进离体环境培养下的奶山羊精原干细胞的自我更新和增殖的方法，其特征在于，包括以下操作：

1)克隆如SEQ.ID.NO.1所示的奶山羊gSirt1基因，并将其克隆到真核表达载体中构建gSirt1真核表达载体；

2)在DMEM-F12培养液中，以奶山羊精原干细胞为待转染的细胞，加入混匀在Opti-MEM中的gSirt1真核表达载体，再加入转染试剂TurboFect进行转染，室温孵育；

3)gSirt1过表达或超表达的奶山羊精原干细胞，其自我更新能力增高，细胞增殖加快。