[发明专利]红马银花的组培繁殖方法有效
申请号: | 201410706386.8 | 申请日: | 2014-11-28 |
公开(公告)号: | CN104488704A | 公开(公告)日: | 2015-04-08 |
发明(设计)人: | 张敬丽;李枝林;张巧玲;吴红芝;王有国;郑硕理;刘巧 | 申请(专利权)人: | 云南农业大学 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 昆明协立知识产权代理事务所(普通合伙)53108 | 代理人: | 马晓青 |
地址: | 650201云南省*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 红马银花 繁殖 方法 | ||
技术领域:
本发明属于植物生物技术中植物组织培养方法,具体地说,涉及杜鹃花红马银花的组织培养快速繁殖方法。
背景技术:
红马银花Rhododendron vialii属于杜鹃花科(Erieaceae)杜鹃花属(Rhododendron)马银花亚属,常绿小灌木。红马银花为杜鹃花中的早花种类,开花期为2-3月份,花鲜红色,新叶为红色,具有较高的观赏价值。分布范围狭窄,居群数目有限,由于植被不断受到破坏,生存受到威胁,已被IUCN和《The Red List of Rhododendrons》(2011版)列为易危VU(Vulnerable species)杜鹃花种类,亟需扩繁、保存和可持续利用。迄今,红马银花没有相关生物技术方法繁殖的研究与报道,为了使红马银花优良的特性能够保存和可持续利用,需要研究该种的组织培养,并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。
发明内容:
本发明的目的是提供红马银花的组织培养方法,使之在种子成苖和扦插困难的的情况下能够繁衍,使该品种的优良性状的保存能够得到保障,同时缩短离体培养时间,提高生根率和幼苗移栽成活率,为易危杜鹃花红马银花的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。
为了实现本发明的目的,本发明提供了如下的技术方案:
红马银花的组培繁殖方法,包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导、壮苗并生根培养、试管苗移栽步骤,选择红马银花的种子为外植体,进行种子萌发,种子萌发培养基为改良Anderson+0.1mg/L NAA;丛芽诱导培养基为改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/L NAA,pH5.2-5.4;壮苗培养基为改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA;生根培养基为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC,其中所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
根据所述的组培繁殖方法,其中所述外植体消毒先用5%洗衣粉水浸泡清洗10min,再用无菌水冲洗至无泡沫,然后采用75%的酒精消毒30s,无菌水冲洗3遍后再用0.1%升汞溶液进行表面消毒5min,不断震荡后用无菌水清洗3-5遍。
根据所述的组培繁殖方法,其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的温度为20-23℃,湿度30-45%。
根据所述的组培繁殖方法,其中所述丛生芽诱导和壮苗及生根培养的光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX。
根据所述的组培繁殖方法,其中所述试管苗移栽是生根组培苗在培养瓶内培养60天以后,炼苗7天,再移栽于温室大棚。
根据所述的组培繁殖方法,其中试管苗移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土,pH为5.2-5.4。
根据所述的组培繁殖方法,其中试管苗移栽在早上8-11点,温度为18-25℃下进行。
本发明的红马银花的组培繁殖方法可具体描述为:选取红马银花种子为外植体,用5%的洗衣粉水进行浸泡10分钟后反复冲洗3-5遍直至无泡沫,然后用75%酒精消毒30s,后用0.1%升汞溶液进行消毒5min,不断震荡后用无菌水清洗3-5遍;将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分,接种至诱导萌发培养基改良Anderson+0.1mg/l NAA,pH5.4,温度20-23℃,湿度30-45%,光照条件为自然光2000-2500LUX+人工辅助光1500-2000LUX下培养,无菌苗长到1-2cm后转接入丛芽诱导培养基改良Anderson+1.2mg/L ZT+0.1mg/L NAA中进行增殖,待丛生芽长到2-3cm转入壮苗培养基改良Anderson+0.5mg/L 2-IP+0.1mg/L NAA进行壮苗,完成壮苗周期后将苗转入生根培养基,生根培养基为改良Anderson+0.1mg/L ZT+2mg/L NAA+0.5g/L AC,50天生根培养后进行组培苗炼苗7天后,移栽于基质为1份珍珠岩+1份腐殖土,pH为5.4,湿度50-60%的大棚内,每天早晚各喷水一次;其中所述的改良Anderson培养基为NH4NO3减半。
本发明技术方案的提出是基于下述的研究基础:
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