[发明专利]一种植物甾醇混菌发酵生产11ɑ-OH-ADD的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种甾体激素重要中间体的制备方法，具体涉及一种植物甾醇混菌发酵生产11ɑ-OH-ADD的方法。

背景技术

11ɑ-OH-ADD(即11ɑ-羟基-1,4-二烯雄甾-3,17-二酮)是甾体激素类药物重要中间体，甾体药物生产中，甾体母核中C1,2位导入双键及C11位ɑ羟基化都是重要的甾体转化反应，母核中C1,2位置导入双键后，能成倍的增加抗炎作用，而通过C11位ɑ羟基化可以引入高生理活性基团，从而大大增加疗效，减少副作用。11ɑ-OH-ADD可用于合成倍他米松，地塞米松，泼尼松龙等多种甾体药物，市场需求量巨大。

从植物甾醇制备11ɑ-OH-ADD，现有技术大都分两步进行。申请公开号为CN102477404的中国专利公开了一种植物甾醇经微生物转化为ADD的方法及所用培养基，具体是以植物甾醇为原料先生产ADD，经提取分离精制后，再以ADD为原料生产11ɑ-OH-ADD；申请公开号为CN102827913的中国专利公开了一种微生物混菌发酵制备11ɑ-OH-ADD的方法，具体是以植物甾醇为原料先生产4AD，经提取分离精制后，再以4AD为原料生产11ɑ-OH-ADD；上述两种方案都会存在先提取后再发酵，导致收率低且能耗高，且生产周期较长。

发明内容

为解决现在技术所存在的问题，本发明提供一种以植物甾醇为原料经混菌发酵生产11ɑ-OH-ADD的方法，以植物甾醇为原料，成本更低，生产周期更短，一次收率更高，是目前生产11ɑ-OH-ADD中最经济、快捷的方法。

本发明的反应式如下：

本发明采用如下技术方案实现：一种植物甾醇混菌发酵生产11ɑ-OH-ADD的方法，以植物甾醇为原料，经分枝杆菌和赫曲霉混合发酵生产11ɑ-OH-ADD。

优选地，上述方法所使用的发酵培养基配方为：酵母膏15～20g/L，硝酸钠80～100g/L，磷酸二氢钾1.2～1.5g/L，磷酸氢二钠2.4～2.6g/L，葡萄糖6～8g/L，氯化钾1～2g/L，七水硫酸镁8～10g/L，大豆油20～30g/L，吐温-800.8～1.5g/L，植物甾醇20～40g/L；所述发酵培养基的PH为6.0～8.0。

优选地，将配置好的发酵培养基升温至80～85℃，保温搅拌1.0～1.2h。

优选地，采用两级或多级发酵方式，预先分别培养好分枝杆菌菌种和赫曲霉菌种。

优选地，分枝杆菌菌种的接种量为15～20％，赫曲霉菌种的接种量为10～15％。

优选地，接入分枝杆菌菌种40～48h后再接入赫曲霉菌种。

优选地，发酵转化完毕后，85～95℃灭活，冷却至15～25℃抽滤，滤饼用二氯甲烷萃取。

具体步骤如下：

一、菌种培养

分枝杆菌菌种培养：将分枝杆菌接种至液体种子培养基中，180rpm，30℃，培养42～48h。

赫曲霉菌种培养：将赫曲霉接种至液体种子培养基中，180rpm，29℃，培养42～48h。

二、发酵转化

按如下配方配置发酵培养基：酵母膏15～20g/L，硝酸钠80～100g/L，磷酸二氢钾1.2～1.5g/L，磷酸氢二钠2.4～2.6g/L，葡萄糖6～8g/L，氯化钾1～2g/L，七水硫酸镁8～10g/L，大豆油20～30g/L，吐温-800.8～1.5g/L，植物甾醇20～40g/L；所述发酵培养基的PH为6.0～8.0；将培养基升温至80～85℃后，保温搅拌1～1.2h，待甾醇充分分散后蒸汽灭菌。

先接入分枝杆菌菌种，接种量为15～20％，转化温度为30～32℃，转化培养40～48h后，再接入赫曲霉菌种，接种量为10～15％，转温度为29～31℃。

三、提取分离

发酵转化完毕后，85～95℃灭活，冷却至15～25℃抽滤，滤饼用二氯甲烷萃取，浓缩至干，得11ɑ-OH-ADD粗品，将11ɑ-OH-ADD粗品用甲苯打浆，冷却析晶，抽滤得11ɑ-OH-ADD精品。

与现在技术相比，本发明具有如下有益效果：通过混菌发酵的协同作用，原料转化更完全，产品总收率更高，减少一步后处理，溶剂消耗、三废排放、能源消耗更少，降低生产成本的同时更加环保。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明一种植物甾醇混菌发酵生产11ɑ-OH-ADD的方法作进一步的详细说明。

实施例1

一、菌种培养