[发明专利]高抗氧化活性复合寡肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品技术领域，特别涉及一种高抗氧化活性复合寡肽及其制备方法。

背景技术

动植物蛋白、海洋蛋白、废弃蛋白资源等酶解产生的抗氧化肽因其分子量小、易吸收、活性强、安全性高等特点，并能有效地清除体内过剩的活性氧自由基，保护细胞和线粒体的正常结构和功能，防止脂质过氧化的发生，在医药、化妆品、保健品和食品与饲料添加剂等方面有广阔的应用前景。大豆蛋白和鸡蛋蛋白具有较高的生物效价和营养价值，水解后制备成的具有生理活性的大豆肽和鸡蛋肽的生物效价和营养价值也都很高，其中有关这两类蛋白来源酶解肽的抗氧化活性研究的报道也较多，近年来受关注程度呈递增趋势。此外，许多研究发现多种功效因子联合作用比单一组分具有更好的效果，即呈现协同作用，这种作用可能源于具有不同作用机制的功效因子之间存在互补作用或相互修复作用。已有研究证实，肽与肽之间及肽与非肽类抗氧化成分之间存在协同作用效果，且这种协同作用在不同的抗氧化评价体系中存在显著差异。

尽管部分抗氧化肽被证实具有强效的抗氧化活性，但其分离纯化过程一般较繁琐，成本较高。相对于纯肽，蛋白水解母液或粗分离组分从产品开发方面更具有可行性。因此，如何提高蛋白水解液的生物活性显得尤为重要。许多研究显示碱性蛋白酶和胃蛋白酶对于蛋白原料中的高活性功能肽的释放具有显著效果。除了通过蛋白原料与蛋白酶的双向筛选外，将活性较高的不同水解液或粗分离组分进行复配以发挥其协同效应，也是提高目标产品生物活性较好的一种方式。

目前，缺乏一种具有抗氧化活性强的高抗氧化活性复合寡肽及其制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗氧化活性强的高抗氧化活性复合寡肽及其制备方法。

本发明的技术方案如下：本发明提供了一种高抗氧化活性复合寡肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)用胃蛋白酶和碱性蛋白酶以单酶或有次序的双酶分别对鸡蛋清蛋白和大豆蛋白进行水解，取上述鸡蛋清蛋白水解液的一种和上述大豆蛋白水解液的一种；

(2)采用超滤和树脂富集上述两种蛋白来源水解液中的强疏水性抗氧化肽，通过梯度洗脱获得目标肽，即为树脂粗分离组分；

(3)将步骤(1)中得到的两种蛋白来源水解液或/和步骤(2)中得到的两种蛋白来源水解液的树脂粗分离组分分别进行两两复配，得到复合寡肽。

进一步地，在步骤(1)中，分别以鸡蛋清蛋白粉和大豆蛋白粉为原料，加水配置成蛋白悬浊液，在85℃-95℃保持10min，并不断搅拌使蛋白变性，冷却至室温，加入碱性蛋白酶进行水解；酶解结束后，加入胃蛋白酶水解，反应后灭酶，冷却至室温后调pH值至5.0-6.0，离心并收集上清液；

在步骤(2)中，对步骤(1)所得上清液进行超滤，收集滤过液，真空浓缩后冷冻干燥鸡蛋清蛋白抗氧化肽和大豆蛋白抗氧化肽粗品；所得上述粗品用DA201-C大孔吸附树脂吸附，然后用乙醇梯度洗脱，收集、真空浓缩并冷冻干燥洗脱组分，即可获得两种蛋白的高抗氧化活性树脂粗分离组分；

在步骤(3)中，鸡蛋清蛋白酶解肽和大豆蛋白酶解肽的水解液的肽浓度比为1：3-3：1进行复配；所述两种水解液来源的粗分离组分的肽浓度比为1：3-3：1进行复配。

进一步地，在步骤(1)中，鸡蛋清蛋白或大豆蛋白悬浊液的质量浓度为1％-6％。

更进一步地，在步骤(1)中，碱性蛋白酶酶解条件为：酶的添加量为6000U-12000U/1g蛋白；pH值为6.5-11.0；水解温度为50℃-70℃，酶解时间为1-6h。

进一步地，在步骤(1)中，胃蛋白酶酶解条件为：酶的添加量为8000U-25000U/1g蛋白；pH值为1.0-2.5；温度为35-40℃，水解时间为1-6h。

进一步地，在步骤(1)中，胃蛋白酶和碱性蛋白酶的水解顺序可以颠倒，或用上述两种酶的一种进行鸡蛋清蛋白水解液和大豆蛋白水解液的制备。

更进一步地，在步骤(1)中，灭酶条件为：95℃保持15min，冷却至室温后在转速4000r/min离心15min。

进一步地，在步骤(2)中，超滤的膜截留分子量为3kDa；超滤操作前超滤膜要先后用乙醇、pH值为1-2的酸液、pH值为11-12的碱液和去离子水各循环清洗20min，操作压为0.1-0.2MPa。