[发明专利]一种稳定的重组人抗CD20单克隆抗体的冻干制剂

说明书

发明领域

本发明属于药物制剂领域。具体涉及一种稳定的重组人抗CD20单克隆抗体的冻干制剂。

背景技术

CD20是B淋巴细胞表面的特异性的标志性分子，表达于95％以上的正常或恶性B淋巴细胞表面。研究表明，CD20具有钙离子通道的功能，通过调节细胞内钙离子的浓度，影响细胞周期，调节细胞增殖与分化，甚至导致细胞凋亡的发生。作用机制主要有补体依赖性细胞毒性反应(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)(JohnsonP.SeminOncol,2003,30(1Suppl2):3-8)以及提高细胞对细胞毒作用的敏感性和免疫接种作用等也均导致B细胞的凋亡(GhetieMA.Blood,2001,97(5):1392-1398.)。同时，CD20在造血干细胞、祖细胞、正常浆细胞以及人体其他正常组织都没有表达，因此抗CD20可以作为B淋巴细胞瘤治疗的一个很好的治疗靶点。抗CD20单克隆抗体能通过多种机制对B细胞来源的肿瘤进行杀伤。自1997年第一个抗CD20治疗性单克隆抗体利妥昔单抗(rituximab,商品名美罗华)批准上市至今,该类药物发展迅速。其中，重组人抗CD20单克隆抗体如奥法木是完全人源化的第二代抗CD20单克隆抗体，其与CD20分子上的大环和小环靶向结合后,通过ADCC和CDC等途径特异性诱导CD20细胞凋亡,从而专一性地杀灭B淋巴瘤细胞。

目前已上市的抗CD20的单抗药物包括利妥昔、奥法木、obinutuzumab等，均为液体制剂。单克隆抗体等蛋白大分子相比小分子化学药物来说大得多，并且结构远为复杂，因此其制剂面临着一些问题如蛋白的化学不稳定性和物理不稳定性。化学不稳定性可由脱酰胺、外消旋化、水解、氧化、β消除或二硫化物交换造成。物理不稳定性可由例如变性、聚集、沉淀或吸附造成。以液体制剂的形式存在的蛋白，更容易发生上述的理化反应，并且会导致药物失去活性。另外，液体制剂在长途运输过程中，剧烈震荡会使蛋白容易变性，失去活性。

冷冻干燥(冻干)是指把药品溶液在低温下冻结，然后在真空条件下升华干燥，除去冰晶，待升华结束后再进行解析干燥，除去部分结合水的干燥方法。由于冻干药品呈多孔状、能长时间稳定贮存、并易重新复溶于水而恢复活性，因此冷冻干燥技术广泛应用于制备固体蛋白质药物、口服速溶药物及药物包埋剂脂质体等药品。冻干制剂相比液体制剂能显著的提高蛋白药物的稳定性。目前新上市的单克隆抗体药物也逐渐开始采用冻干制剂，如Xolair，KADCYLA等。

葛兰素史克的Charlene等人发明包含重组人抗CD20单克隆抗体(奥法木)的稳定的液体药物制剂(公开号：US2010/0189721A1)。这项发明一定程度上缓解了蛋白的聚集沉淀问题。但是也有其不足之处，该液体制剂并不是非常的稳定，虽然其在4℃条件下能储存2年，但在25℃仅能保证3个月内稳定，40℃仅能保持一个月，55℃以上仅能保持一天。另外，该液体制剂对光照比较敏感，在光照6h后，其蛋白聚集体就有比较明显的增加。

目前还没有上市的抗CD20单克隆抗体的冻干制剂，因此需要提供一种稳定的、可供临床使用的、适宜存储的重组人抗CD20单克隆抗体冻干制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定的并适合长期储存的重组人抗CD20单克隆抗体冻干制剂。本发明的冻干制剂外观疏松、饱满、完整，相对液体制剂稳定性显著提高，易于生产和贮存。冻干制剂复溶性好，经复溶后蛋白理化性质及活性没有显著变化。

本发明所述的重组人抗CD20单克隆抗体冻干制剂，包括重组人抗CD20单克隆抗体、缓冲体系、保护剂、赋形剂。

重组人抗CD20单克隆抗体的冻干制剂是通过冻干液体制剂制备的，其中冻干前的液体制剂中所含抗体蛋白含量为5-40mg/mL。

本发明选择的缓冲体系为组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系、醋酸盐缓冲体系或枸橼酸盐缓冲体系。在冻干前的液体制剂中缓冲盐的含量为10-40mM，pH为4.5-7.5，更优选为5.0-7.0。

保护剂的加入在冻干的各个阶段均能对蛋白质生物制品起到一定的保护作用。本发明选择的保护剂为糖类，优选为蔗糖和海藻糖。保护剂在冻干前的液体制剂中的含量为10-40mg/ml。

在赋形剂的存在下，抗CD20抗体更容易赋形冻干，得到的冻干制剂外观疏松、饱满、完整。赋形剂为糖类、多醇类，优选为甘露醇和右旋糖酐，更优选为甘露醇。赋形剂在冻干前的液体制剂中的含量为10-40mg/ml。