[发明专利]血浆中厦门霉素的定量检测以及其代谢物的定性检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药学领域，具体涉及在血浆中厦门霉素A、厦门霉素B及其相关苯并吡喃化合物的分析方法和在药代动力学中的应用。

背景技术

目前，关于具有抗纤维化活性的苯并吡喃benzopyran类化合物，即厦门霉素A、B、C、D，已有一些文献报道，如日文专利[Kawamura，N.；Tsuji，E.；Watanabe，Y.；Tsuchihashi，K.；Takako，T.Benzopyran derivatives，their manufacture with Streptomyces species.and their use for treatment of asthma and rheumatoid arthritis.Daiichi Seiyaku Co.，Ltd.；Mercian Corp.：Kyoto，Japan，7March 2000.]和本申请人前期的工作文献[Xu，M.J.；Liu，X.J.；Zhao，Y.L.；Liu，D.；Xu，Z.H.；Lang，X.M.；Ao，P.；Lin，W.H.；Yang，S.L.；Zhang，Z.G.；Xu，J.，Identification and characterization of an anti-fibrotic benzopyran compound isolated from mangrove-derived Streptomyces xiamenensis.Mar Drugs 2012，10，(3)，639-54；Liu，X.J.；Xu，M.J.；Fan，S.T.；Wu，Z.；Li，J.；Yang，X.M.；Wang，Y.H.；Xu，J.；Zhang，Z.G.，Xiamenmycin attenuates hypertrophic scars by suppressing local inflammation and the effects of mechanical stress.J Invest Dermatol 2013，133，(5)，1351-60；Yang，Y.；Fu，L.；Zhang，J.；Hu，L.；Xu，M.；Xu，J.Characterization of the xiamenmycin biosynthesis gene cluster in Streptomyces xiamenensis318.PloS one 2014，9，e99537.]中，曾报道了厦门霉素A-D的提取分离、结构鉴定、以及厦门霉素生物合成途径，并报道了其具有抗炎、抗肺纤维化和抗增生性瘢痕活性，是一类抗纤维化的活性先导化合物。

针对厦门霉素的进一步药学研究，特别是体内药代动力学特性的研究，对于该类先导化合物的成药性非常重要，因此亟需建立一套定量分析厦门霉素A，即母药，的定量方法。同时，还需要对于厦门霉素A进入体内后的代谢物，如厦门霉素B，即代谢物，的定性分析的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一套液相色谱串联质谱MS/MS的方法，定量检测血浆样本中厦门霉素A。同时提供一套超高效液相串联qTOF质谱的方法，定性检测血浆样本中，厦门霉素A的代谢产物，厦门霉素B及相关苯并吡喃类化合物的方法。

本发明目的是通过以下技术方案来实现的：

第一方面，本发明涉及一种液相色谱串联MS/MS质谱法定量检测血浆样本中厦门霉素A的方法，包括步骤(1)样品的制备和步骤(2)检测方法：

步骤(1)样品制备采用包括以下步骤的方法：向待测样品中依次加入3倍体积的含有维拉帕米为内标的甲醇溶液，并混匀；离心，收集上清，进行分析。通过该方法可以有效提取血样中的厦门霉素A。

步骤(2)检测时液相色谱条件如下：色谱柱为反相色谱柱，流动相为流动相A：0.1％(体积百分比浓度)甲酸5mM甲酸铵水溶液；流动相B：甲醇；梯度洗脱条件：体积比为45％B～85％B在两分钟内连续梯度变化，流速为0.3毫升/分钟。45％B～85％B指的是，流动相A、B的起始体积比为55∶45，终体积比为15∶85。更优选梯度洗脱条件为：0min、45％B，2min、85％B，2.8min、85％B，2.9min、45％B，4.5min、45％B；流速为0.3毫升/分钟。通过摸索多种色谱条件意外发现，该色谱条件能够将厦门霉素A与其他血样中的杂质分离，定量数据准确。

优选的，质谱采用电喷雾离子化源，电离模式为正离子选择反应检测。该方法具有灵敏度高，线性范围宽，简单易行的特点。