[发明专利]猪冷冻精液稀释液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种猪冷冻精液稀释液的制备方法。

背景技术

生物技术飞速发展的今天，一些优秀种公畜的精液通过相关技术的处理制成冷冻精液，并通过人工授精技术大力推广使用。其中猪冷冻精液与人工授精技术的结合在现代养殖业中有非常广阔的市场前景，可以不受该公猪死亡、采精间隔、繁殖不育的限制；不受时间和地理位置差异的限制，并且可以大量减少公畜的饲养数量，降低饲养成本、使优质基因遗传概率达到最大化，为养殖业带来巨大的经济效益。从健康角度考虑，冻精为疾病检测提供了足够的时间，冻精还为大型的人工授精站爆发疾病时提供了稳定的精液供应保障。总之，猪精液冷冻技术的发展和冷冻精液的使用在品种引进、杂交改良、以及提高繁殖性能、疾病控制及遗传多样性保护方面具有重要意义。

稀释液是猪、牛、羊等精液冷冻时必不可少的组成成分，在冷冻过程中对精子起到稀释、缓冲、营养和保护的作用，并有效降低低温对精子的影响。

精液冷冻是保存遗传资源，建立精子基因库的重要措施。而冷冻后精子质量的好坏与家畜的妊娠率，产子率等密切相关。目前为止，猪精子在冷冻以后的精子活力、顶体完整率、质膜完整率等不很理想，致使在商品化养猪生产中，利用冷冻精液进行人工授精的母猪受胎率和产仔率较低而不能广泛应用，严重降低了优质公猪的利用率，饲养成本不能降低，生态环境的污染更没有得到缓解。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述现有技术的缺陷问题，提供一种猪冻精液稀释液的制备方法。

本发明的技术方案如下：

包括稀释液A、稀释液B、稀释液C和稀释液D；四种稀释液各原料的质量配比及配制步骤如下：

 稀释液A：葡萄糖3.5～5.0g、柠檬酸钠0.18～0.30g、氯化钠0.1～0.23g、青霉素0.2～0.45g；

将上述原料溶于100ml双蒸水中，调pH值至6.5～7.5，放在一旁降至室温，移至冰箱中冷藏备用；

稀释液B：乳糖5.00～12.5g、葡萄糖2～5.1g、青霉素80万u～100万u、链霉素0.20g～0.5g，鲜蛋黄：25～33ml；

将称取的上述原料溶于100ml双馏水，制成稀释液B；降至室温，调pH值稳定至6.5～7.5，移至冰箱中冷藏备用；

稀释液C：乳糖5.00～12.5g、葡萄糖2～5.1g、青霉素80万u～100万u、链霉素0.20g～0.5g，鲜蛋黄25～33ml,甘油6.7～9.5g，椰油单乙醇酰胺0.44～0.50g,十二烷基硫酸钠0.10～0.16g,三乙醇胺0.025～0.050g,盐酸0.01～0.035g,蒸馏水0.4～1.2g； 

将称取的上述原料乳糖、葡萄糖、青霉素、链霉素溶于100ml双蒸水制成稀释液基础液；然后加入鲜蛋黄、甘油、椰油单乙醇酰胺、十二烷基硫酸钠、三乙醇胺、盐酸、蒸馏水，搅拌均匀；降至室温，调pH值稳定至6.5～7.5，移至冰箱中冷藏备用；

稀释液D：无水柠檬酸0.3～0.89g、咖啡因0.025～0.045g、三羟甲基氨基甲烷0.45～0.90g、碳酸氢钠0.30～0.85g、乙二胺四乙酸二钠0.18～0.43g、丙酮酸钠0.0085～0.042g、葡萄糖2.5～4.3g；

将称取的上述原料溶于100ml双蒸水制成稀释液D；降至室温，调pH值稳定至6.5～7.5，移至冰箱中冷藏备用。

进一步，所述的四种稀释液所用的双蒸水的温度均为32-38℃。

1、本发明设计的机理为：由于猪的精子较他家畜精子脂肪含量高，在降温和冷冻处理过程中不易存活这一特性，所以我们研发了猪的冷冻精液专项配方和独特的操作流程；

2、专项的稀释液配方：使精子在不同的降温处理阶段给予优势条件，使其不断地得到加能，不但有利于精子在解冻时顺利复苏，还有利于精子在冷冻的过程中抵抗冷冲击，保持精子细胞的完整。在稀释液D中复苏的精子会得到再次加能，最终使经过冷冻的精子的运动速度、存活时间、受精能力都强于常温精液中精子的水平。

   3、精液采集与独特的降温处理方式：精液采集后会采用特制流程对精子代谢物和精清中一些有害物质进行除杂，再次加入营养物质，为进行下一阶段的降温处理提供能源，并在冷冻之前给予抗冷冻物质，准确控制精子与抗冷冻成分接触时间，既能降低甘油对精子的损害同时还起到冷冻保护作用。

完成以上发明机理包括以下成分及作用：