[发明专利]基于核酸适体荧光探针HCy3的同型半胱氨酸试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，主要成分包括：含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液；含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液；同型半胱氨酸标准品；同型半胱氨酸核酸适体荧光探针；所述同型半胱氨酸核酸适体荧光探针为5'和3'两端分别标记荧光芘分子单体的核苷酸单链，该核苷酸单链序列为SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:5中的任意一条DNA片段序列，其序列为：ggcactgtac ggctaagttc ccggatagtg gattggaact ggcataaccc。

2.根据权利要求1所述的一种基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液为含有1～280 mmol/L NH₄Cl, 1~34 mmol/L Tris,1~2mmol/LEDTA-Na₂, pH 7.0~7.2；所述含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液为含有1~10mmol/L MgCl₂。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，所述含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液、含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液、同型半胱氨酸标准品、同型半胱氨酸核酸适体荧光探针为配制好直接使用的液体试剂或是使用前需加水溶解的干粉状态。

4.根据权利要求1~3所述的一种基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒，其特征在于，该试剂盒用于检测肝素抗凝全血或末梢血中的同型半胱氨酸浓度。

5.一种用权利1~3任一所述基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒来检测同型半胱氨酸浓度的方法，其特征在于，方法步骤包括：

（1）血样裂解：将血样和含NH₄Cl、Tris、EDTA-Na₂的红细胞裂解液按1:0.5~5体积比混匀，静置5~30min，再中速离心5~10min，收集上清液；

（2）混合卵育：取20~100μl步骤1）得到的上清液和30~50ul的用含 MgCl₂的0.2M磷酸缓冲液，溶解同型半胱氨酸核酸适体荧光探针得到的同型半胱氨酸核酸适体荧光探针试剂混合，室温下卵育5~15min，使同型半胱氨酸核酸适体荧光探针与血样充分结合，得到测试液；

（3）荧光检测：荧光检测仪检测步骤2）得到的测试液50ul，在荧光检测仪荧光激发后，读取荧光激发后20至100ns时间段内波长在480~500nm的荧光值；

（4）结果计算：使用生物医学作图软件，参照同型半胱氨酸标准样品制作的标准曲线，结合步骤3）中检测到的荧光值计算出血样中同型半胱氨酸的浓度。

6.根据权利要求5所述的一种用基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒来检测同型半胱氨酸浓度的方法，其特征在于，所述同型半胱氨酸核酸适体荧光探针试剂中同型半胱氨酸核酸适体荧光探针浓度为200~400 nmol/L，所述同型半胱氨酸核酸适体荧光探针为5'和3'两端分别标记荧光芘分子单体的核苷酸单链，该核苷酸单链序列为：ggcactgtac ggctaagttc ccggatagtg gattggaact ggcataaccc。

7.根据权利要求6所述的一种用基于核酸适体荧光探针的同型半胱氨酸试剂盒来检测同型半胱氨酸浓度的方法，其特征在于，所述的同型半胱氨酸核酸适体荧光探针不与同型半胱氨酸结合时，核酸适体处于比较松散的结构，5'和3'两端的芘分子单体相互游离, 荧光激发后发射波长在 370~ 400nm 之间；所述的同型半胱氨酸核酸适体荧光探针与同型半胱氨酸结合时，同型半胱氨酸诱导其发生结构改变，核酸适体5'和3'两端的芘分子单体相互靠近，形成激发态二聚体，荧光激发后激发态二聚体发射波长在 480 到 500nm之间。