[发明专利]一种灵芝孢子活性成分的提取方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物与化妆品领域，具体涉及灵芝孢子活性成分的提取方法，以及灵芝孢子活性成分在抗衰老产品中的应用。

背景技术

灵芝，又称之为灵芝草、仙草等，原产于亚洲东部，中国分布最广的在江西。灵芝属于担子菌亚门、多孔菌目、多孔菌科、灵芝菌属的真菌。李时珍在《本草纲目》中指出，灵芝有“增智慧，好颜色”之功效，灵芝是一种具有抗皱、消炎、清除色斑、保护皮肤的真菌。灵芝含有抑制黑色素的成分及多种对皮肤有益的微量元素等，这些成分能够通过减少人体自由基，加速细胞的再生，增加皮肤的厚度并增加胶原质，达到丰润皮肤、消除细纹与皱纹的效果。其中的多糖成分能够通过保持和调节皮肤水性，恢复皮肤弹性，使皮肤湿润、细腻。近年来，大家对灵芝中的灵芝酸、灵芝多糖及灵芝多肽的提取及药用价值研究颇多，而真正提取灵芝孢子活性成分的很少，更别提将其应用于抗衰老产品中。本发明主要研究灵芝孢子活性成分的分离以及该活性成分在抗衰老产品中的应用。

灵芝孢子长在灵芝菌盖中，成熟后由灵芝菌管弹射出来，一些会落在菌盖表面，一些会飘洒在四周。对于灵芝孢子，其呈褐色、卵形(8.5～ll.2)μm×(5.2-6.9)μm，具双层壁。且灵芝孢子包裹的两层壁十分坚韧，一般的化学，物理方法很难将其打破，故限制了对其化学成分、生物活性成分的研究。建立有效的破壁方法，可以促进对其生物活性成分的提取、药用价值及抗衰老方面的研究。

现有的破壁方法主要有两种：一是生物破壁法，以无菌的灵芝孢子粉加入蛹虫草进行固体发酵，使灵芝孢子粉破壁。由于其制备过程中需要经过长时间的发酵，而且发酵后必须经过固液分离，干燥，才能得到破壁后的灵芝孢子粉，工艺较为复杂，容易引入其它杂质，破坏灵芝孢子的营养成分。二是机械粉碎法，精选灵芝孢子粉，添加20～80％的水，50℃干燥12h以上，放入罐体，球料比(2-3):1，球料占罐体的四分之三左右，球磨时间4～9h，大珠、中珠、小珠的个数比例为1:1:1，进行破壁处理，得破壁灵芝粉。此种方法球磨效率一般，破壁率较低，球磨过程中对于营养成分的损失较大，且容易引入重金属元素。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种更为有效的破壁方法，即先将灵芝孢子用质量浓度为0.2-0.5％果胶酶和质量浓度为0.2-0.5％纤维素酶联合消化后，再将干冰和无水乙醇的组成混合溶液将温度控制在(-60℃)-(-20℃)，采用超声波机械粉碎破碎的方法破碎灵芝孢子细胞壁，从而有效得到灵芝孢子活性成分。并将灵芝孢子活性成分进行纯化冻干，应用在抗衰老产品中。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种灵芝孢子活性成分的提取方法，将准备好的灵芝孢子进行以下处理：

(1)软化处理：将灵芝孢子浸泡在质量浓度为0.2-0.5％纤维素酶和质量浓度为0.2-0.5％果胶酶组成的混合酶溶液里，软化灵芝孢子壁；

(2)低温真空干燥：将灵芝孢子置于(-60℃)-(-20℃)的干冰和无水乙醇的混合溶液中保存，真空干燥处理；

(3)低温破壁：在(-60℃)-(-20℃)下对灵芝孢子用超声波进行机械粉碎破壁，得到灵芝孢子提取物。

优选的，软化所述灵芝孢子壁3-8小时。

优选的，所述灵芝孢子低温保存时间为1-5小时。

优选的，将所述灵芝孢子置于干冰和无水乙醇的混合物中，并优选为-20℃的条件下，采用超声波进行机械粉碎破壁。本发明中采用的机械粉碎破壁方法相对传统的机械粉碎方法其时间更短，破壁率更高，可充分使灵芝孢子内部有效活性成分释放，提高了灵芝孢子制品的应用价值。

所述灵芝孢子的准备包括以下步骤：

(1)收集：人工培养灵芝结束后，收集灵芝孢子；

(2)筛选：将灵芝孢子用筛网进行过滤；

(3)漂洗：用水冲洗过滤后的灵芝孢子。

优选的，所述灵芝孢子筛选采用200目以上的筛网进行过滤。

一种将权利要求1的灵芝孢子提取物制成灵芝孢子活性成分冻干粉的方法，包括以下步骤：

(1)过滤：收集灵芝孢子提取液，用孔径小于0.45μM的滤膜过滤；

(2)浓缩：浓缩上清液，浓缩至浓缩液中蛋白浓度为50±0.5μg/ml；

(3)过滤：经浓缩液采用孔径小于0.22μM的滤膜过滤；

(4)冻干处理：冻干温度为(-20℃)-(-35℃)，真空度为50-200Pa，冻干时间为24-36小时，即得到灵芝孢子活性成分冻干粉。