[发明专利]应用液质-质联用仪测定淡水池塘底泥中氯霉素的方法

权利要求书

1.一种应用液质-质联用仪测定淡水池塘底泥中氯霉素的方法，其特征在于包括步骤如下：

(1)养殖池塘底泥样品采集，用采泥器取表层沉积物，放在广口瓶中在-18℃冰箱保存；

(2)样品的提取，称取样品5.00g置50ml离心管中，加入2ml水润湿，加入500μl浓度为10.0ng/ml的氯霉素内标溶液、5ml乙腈及4％氯化钠溶液5ml，漩涡振荡2min，超声萃取20min后，静置10min，用转速为15000r/min的离心机离心10min，提取上清液至于另一50ml离心管中；

(3)重复上述步骤(2)的提取过程，合并两次提取液，在合并的提取液中加入正己烷5ml，漩涡振荡2min，用转速为5000r/min的离心机离心10min，弃去正己烷层溶液，重复一次，得提取液；

(4)在上述(3)步所得提取液中加入水饱和乙酸乙酯溶液5ml，漩涡振荡2min，用转速为5000r/min的离心机离心10min，上层液转移到15ml离心管中，重复提取1次，将两次所得上层液合并；

(5)将上述(4)步所得提取液用氮气吹干，用乙腈－水(5+95)溶液3ml溶解氮气吹干后残留物得备用液；

(6)将固相萃取柱依次用甲醇10ml，水10ml预洗，然后取上述备用液过柱，用水5ml洗柱，用5ml甲醇水(50+50)溶液洗脱，以1ml/min的速度将样品洗脱入15ml离心管中；

(7)将上述洗脱液中加入水饱和乙酸乙酯溶液5ml，涡旋振荡2min，5000r/min，离心5min，取上层液，重复提取1次，合并提取液氮气吹干，得吹干残留物；

(8)用1mL甲醇水(50+50)溶液溶解上步残留物，旋涡后经0.22μm微孔滤膜过滤后用液质-质联用仪上机测定。

2.根据权利要求1所述的应用液质-质联用仪测定淡水池塘底泥中氯霉素的方法，其特征在于所述步骤(8)中用液质-质联用仪上机测定时，检测中各项条件设定为：

①色谱柱:Shim-Pack XR-ODS C₈色谱柱，5μm，75mm×2.0mm(内径)，柱温40℃，流动相为A-水，B-甲醇，流速为0.30mL/min，进样量5μL；

②梯度洗脱条件如表1：

表1 梯度洗脱条件

③其他各项设定：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测(MRM)；电喷雾电压：-4500V；气帘气：20PSI；辅助气：50PSI；去簇电压：-80V及碰撞电压：-10V，离子源温度:500℃；

④化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数如表2所示；

表2化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数

其中*为定量离子；

⑤梯度标准品溶液及内标质量的确定；采用不含目标待测物的基质空白溶液配制梯度标准品溶液(0，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，10.0ng/mL)加入氯霉素-D5内标质量为5.0ng；

⑥确定检测限为0.1μg/kg，定量限为0.3μg/kg；仪器检出限及方法定量限见表3,

表3 线性范围、标准曲线方程、检出限和定量限