[发明专利]一株胁迫条件下低蛋白酶A外泌的酵母菌株

权利要求书

1.一种低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株在高泡沫稳定性啤酒发酵过程中向胞外低分泌蛋白酶A中的用途，其特征在于，所述菌株通过在出发菌株中仅过表达液泡分选受体的VPS10基因全序列获得；

所述出发菌株为模式菌W303-1A；

所述VPS10基因其Gene ID为：852264；

所述啤酒发酵采用氮缺乏的麦汁。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株的构建方法包括如下步骤：

(1)将pPGK1质粒上的强启动子PGK1p-终止子PGK1t片段插入到YEP352表达载体上，再将VPS10基因插入到启动子PGK1p和终止子PGK1t之间，最后将KanMX抗性标记插入表达质粒；

(2)将重组表达质粒导入到出发菌株中,得到过表达VPS10的重组菌株WGV10。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株的构建方法包括如下步骤：

(1)Yep-PVK质粒的构建

①以pPGK1质粒为模板，PCR扩增出强启动子PGK1p-终止子PGK1t基因片段；

②以酵母出发菌株W303-1A总DNA为模板，PCR扩增出VPS10基因；

③以pUC6质粒为模板，PCR扩增出KanMX抗性基因；

将PCR产物依次连接到YEP352表达载体上，得到重组质粒Yep-PVK；

(2)VPS10过表达菌株的构建

将游离过表达质粒Yep-PVK通过醋酸锂转化法导入到出发菌株W303-1A中，得到VPS10游离过表达重组菌株。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，检测低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株方法是以重组菌株的总DNA为模板，通过引物对：

上游引物：TAACTGATCTATCCAAAACTGAA

下游引物：GCTTATAGTAACGGAGGTGTCTT

进行PCR扩增，可获得一条长度为1681bp的特异性条带，所述特异性条带核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示；

出现上述特异性条带则证明被检测菌株为低分泌蛋白酶A酿酒酵母菌株。