[发明专利]一种金纳米粒子负载铱配合物电致化学发光放大体系的伏马菌素新型检测方法

权利要求书

1.一种金纳米粒子负载铱配合物电致化学发光放大体系的伏马菌素新型检测方法，其特征在于电致化学发光-核酸适配体传感器的构建和表征、伏马菌素FB1的高特异、高灵敏检测。

具体步骤：

(1)金电极表面修饰

将与伏马菌素FB1适配体部分互补的巯基化核酸序列滴在金电极表面，过夜反应，通过金巯共价键作用将部分互补的巯基化核酸序列修饰在金电极表面。

(2)电致化学发光-核酸适配体传感器的构建

将羧基化铱配合物首先和巯基乙胺中的氨基进行反应，获得铱配合物-巯基乙胺复合物，随后加入金纳米粒子，通过金巯共价键和铱配合物-巯基乙胺复合体中的巯基结合，从而制备出具有不同修饰不同比例羧基化铱配合物-金纳米粒子复合物(50:1、100:1、200:1、500:1)。在金纳米粒子-铱配合物复合体的表面修饰巯基化的伏马菌素FB1适配体，将核酸适配体-金纳米粒子-铱配合物三者复合体溶液滴入在已修饰好的金电极表面，进行杂交反应。在电致化学发光体系中加入共反应物二丁基乙醇胺，对电致化学发光-核酸适配体传感体系的电致化学发光性能进行表征测试。

(3)伏马菌素FB1的特异性和灵敏性检测

在已构建好的上述电致化学发光-核酸适配体传感体系中加入不同浓度待测伏马菌素FB1溶液。基于伏马菌素FB1和核酸适配体之间的特异性亲和作用，建立伏马菌素FB1溶液浓度和电致化学发光相应信号之间的标准曲线，达到对伏马菌素FB1的灵敏检测。同时，实验设计了不同非目标物(赭曲霉毒素、黄曲霉毒素、L-半胱氨酸、牛血清蛋白)存在的条件下，电致化学发光-核酸适配体传感器对伏马菌素FB1的特异性检测实验。

2.根据权利要求1所述一种金纳米粒子负载铱配合物电致化学发光放大体系的伏马菌素新型检测方法，其特征在于电致化学发光-核酸适配体传感器的构建：

根据ZL 2011 1 0272661.6的权利要求书步骤进行15±2nm金纳米粒子的合成。将合成好的2mL金纳米粒子在5400g的转速下离心10min，去除上清液，将沉淀重悬在100μL的超纯水中。将1mL 500nM羧基化铱配合物和1mL 500nM巯基乙胺中的氨基进行反应，获得铱配合物-巯基乙胺复合物，随后加入上述已浓缩好的100μL金纳米粒子，通过金巯共价键的作用和铱配合物-巯基乙胺复合体中的巯基结合，将混合液在5400g的转速下离心10min，去除上清液，将沉淀重选在100μL的质量分数50％的乙腈溶液中，制备修饰比例为50:1的羧基化铱配合物-金纳米粒子复合物。

取10μL 1μM伏马菌素FB1适配体和上述已制备好的100μL铱配合物-金纳米粒子复合物进行偶联，反应12h后，混合液于5400g的转速下离心10min，去除上清液，将沉淀重悬在100μL的质量分数50％的乙腈溶液中。

取10μL伏马菌素FB1适配体金纳米粒子-铱配合物三者复合体溶液滴入在已修饰好的金电极表面，室温下杂交反应10h。此时，伏马菌素FB1核酸适配体会与金电极表面的部分互补核酸序列发生杂交互补配对，通过水洗去除多余的核酸适配体-金纳米粒子-铱配合物复合体。将此已修饰好的金电极做为工作电极，在电致化学发光体系中加入共反应物二丁基乙醇胺，对电致化学发光-核酸适配体传感体系的电致化学发光性能进行表征测试。

3.根据权利要求1所述基于聚合酶链反应的磁性纳米组装体的手性研究，其特征在于伏马菌素FB1的特异性和灵敏性检测：

在已构建好的上述电致化学发光-核酸适配体传感体系中加入10ng/mL伏马菌素FB1溶液，37摄氏度下孵育2h。此时，伏马菌素FB1分子会和部分互补核酸序列进行竞争反应结合伏马菌素FB1适配体。随着伏马菌素FB1浓度的增大，电极表面杂交的核酸适配体数目逐渐减少，核酸适配体-金纳米粒子-铱配合物复合体随之从电极表面脱落，从而引起电致化学发光信号的降低，建立伏马菌素FB1溶液浓度和电致化学发光相应信号之间的标准曲线，达到对伏马菌素FB1的灵敏检测。同时，实验设计了不同非目标物(赭曲霉毒素、黄曲霉毒素、L-半胱氨酸、牛血清蛋白)存在的条件下，电致化学发光-核酸适配体传感器对伏马菌素FB1的特异性检测实验。