[发明专利]一种新型抗表皮生长因子受体抗体、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种新型全人源表皮生长因子受体EGFR的单克隆抗体、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是继心脏病之后的人类第二大主要死亡因素，目前治疗这种致命性疾病的新疗法已取得了重大进展。正常细胞的增殖是通过各自的配体激活其生长因子受体来控制的，比如生长因子受体酪氨酸激酶。癌细胞也是在生长因子受体的激活下增殖的，但失去了正常增殖的严格控制。这种失控可能是由很多因素引起，比如生长因子的过度表达或生长因子受体的过度表达，以及由生长因子调控的生化途径的自发性激活。参与致癌的受体包括表皮生长因子受体 （EGFR），来源于血小板的生长因子受体 （PDGFR） ，类胰岛素生长因子受体 （IGFR） ，神经生长因子受体（NGFR）和成纤维生长因子受体（FGF）等。

表皮生长因子受体（即EGFR）也称作c-erbB l/Herl，其家族成员都是生长因子受体酪氨酸激酶，它们在细胞表面与特异的生长因子或天然配体相互作用，如与EGF或TGFa  相互作用，由此活化受体酪氨酸激酶。已发现的该家族第一个成员是表观分子量为 165KD 的糖蛋白。

EGFR 在调节肿瘤细胞的生长、修复和生存、新生血管生成、侵袭和转移中具有重要的作用，同时在相当一部分的人类肿瘤中都有表达。在很多恶性肿瘤中，EGFR的表达往往与较差的预后和较低的生存率相关。由此可知，如果有药物能阻断EGFR 的活性，那将会抑制其磷酸化和信号传导，从而起到多重途径的抗肿瘤作用，同时也能增加化疗和放疗的抗肿瘤疗效。在一些研究中，EGFR抑制剂与多种化疗药物和放疗药物联合作用于一些肿瘤细胞株时，表现出累加和协同作用。

EGFR抑制剂主要包括单克隆抗体、酪氨酸激酶抑制剂、喹唑啉pyralo-/吡咯并-/吡啶并嘧啶、配体-毒素和免疫毒素联结物，以及反义核苷酸和EGFR/配体主导的疫苗等。

一些体内和体外实验显示抗 EGFR 抗体成功的抑制了表达 EGFR 的肿瘤细胞株的生长。在实体瘤的治疗中，一些抗 EGFR 单克隆抗体单独应用或与传统治疗方法合并应用的治疗结果令人鼓舞。

以前的技术中已经描述了多种小鼠的抗 EGFR 单克隆抗体，可与EGFR高特异的结合，这些抗体大致可分为两类，一类是可与受体结合但不抑制 EGF结合的抗体，另一类是可与受体结合并且还抑制 EGF结合的抗体。但是患者对鼠源抗体产生的免疫应答限制了这些抗体在人类治疗和体内诊断中的应用。患者会产生 HAMA 反应（人抗小鼠抗体），从而限制了抗体到达其抗原靶标的能力，使抗体的效能降低。

一些研究人员为了减少HAMA 反应，研制出了人鼠嵌合的抗体，其中小鼠可变区（V）与人恒定区（C）连接。该抗体证明在临床上好于鼠源抗体，但是嵌合抗体的小鼠V 区中仍然含有使患者产生免疫原性的成分，限制了其应用。

目前已有全人源抗体Panitumumab（WO9850433）被应用于治疗生长因子过度表达的疾病中。Panitumumab（E7.6.3，ABX-EGF，AMG954，商品名：Vectibix，中文名：帕尼单抗）为全人源单克隆抗体，其结构为IgG2κ，其作用靶点为表皮生长因子受体（EGFR，ErbB-1或HER1 ，该抗体主要用于治疗表皮生长因子受体表达的转移性结直肠癌。Panitumumab是利用XenoMouse技术制备的全人源抗体，不良免疫应答的发生几率很低。

通过结合到EGFR的胞外区，单克隆抗体介导了直接的效应机制，导致了封闭配体结合，受体下调，细胞周期阻滞及诱导凋亡的作用，但也招募了针对癌细胞的免疫调节机制，例如ADCC效应及CDC效应。然而并非所有的抗体都可以介导ADCC效应，IgG1比IgG2有更强的引发ADCC效应的能力。尽管EGFR是抗癌治疗中一个有效的靶点，但针对EGFR的抗体也可以靶向其他正常组织，如：肝脏，皮肤和胃肠道等正常组织，这可能形成剂量限制性的副反应及不同类型的毒副作用的主要原因。