[发明专利]一种Au@Pt酶模拟物标记的盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Au@Pt酶模拟物标记的盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒。

背景技术

盐酸克伦特罗是一种人工合成用于治疗哮喘的药物，20世纪70年代美国将其引入畜禽生产，可以促进肌肉生长、减少胴体脂肪、提高瘦肉率。但长期使用该药物会在动物可食性组织中残留，人食用后会引起中毒，因此我国和欧盟均禁止应用盐酸克伦特罗作促生长剂。然而受经济利益的驱使，许多不法企业和生产商依然进行非法添加，这给人民的身体健康和生命安全造成潜在的危害。因此，有必要建立快速、灵敏、有效和廉价的检测技术和方法。

目前，对于盐酸克伦特罗的检测技术包括快速筛选法和仪器确证法。其中，快速筛选主要以胶体金试纸条和酶联免疫试剂盒(ELISA)为主。胶体金试纸条灵敏度明显偏低，常规ELISA试剂盒中酶的活性受温度影响较大，且价格较高。仪器确证法包括气相色谱质谱联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)等。仪器确证技术虽然测定准确、回收率高、特异性好，但样品基质复杂，前处理的过程耗时长，对样品的灵敏度和准确度影响较大并且最终检测所需设备昂贵，使得基层单位和企业难以实现现场快速检测。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测待测样品中盐酸克伦特罗浓度的方法。

本发明提供的检测待测样品中盐酸克伦特罗浓度的方法包括如下步骤：

(1)将盐酸克伦特罗单抗包被到酶标板上，待用；

(2)向包被盐酸克伦特罗单抗的酶标板中加入盐酸克伦特罗标准溶液或待测样品，反应；

(3)加入Au@Pt纳米颗粒标记的二抗，反应；

(4)加入底物显色，显色后各孔终止反应；

(5)用酶标仪检测加入标准品的各孔的吸光度值，以盐酸克伦特罗标准溶液浓度为横坐标、以酶标仪的读数为纵坐标绘制标准曲线；

(6)用酶标仪检测加入待测样品的孔的吸光度值，将吸光度值代入所述标准曲线，即得待测样品中盐酸克伦特罗的浓度。

上述方法中，所述Au@Pt纳米颗粒标记的二抗的获得方法包括如下步骤：

A、将Au@Pt纳米颗粒制成Au@Pt纳米颗粒悬浮液；

B、将Au@Pt纳米颗粒悬浮液离心，得到Au@Pt纳米颗粒沉淀物；

C、向Au@Pt纳米颗粒的水悬液中加入聚苯乙烯磺酸钠，反应；

D、反应后离心，倒掉上清液分离出沉淀物，将沉淀物用水溶解，得到修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液；

E、将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液中，反应，得到所述的Au@Pt纳米颗粒标记的二抗。

上述方法中，所述将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液前，还需将二抗和修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液进行稀释的步骤；

所述将二抗进行稀释的方法：将浓度为6mg/ml的二抗按照1:1000的比例进行稀释，得到稀释后的二抗；

所述将修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液进行稀释的方法：将浓度为5nM的修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液按照1:4的比例进行稀释，得到稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液。

上述方法中，所述将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液中的方法：将所述稀释后的二抗与稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液混合，所述稀释后的二抗与所述稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液的体积比为4:100。

上述方法中，所述步骤E中反应条件是：在4℃下反应4天。

上述方法中，所述底物为四甲基联苯胺。

上述方法中，所述显色后各孔加入50μL的浓度为4M的硫酸溶液终止反应。

上述方法中，所述用酶标仪检测吸光度值时的波长为450nm。

本发明的另一个目的是提供Au@Pt纳米颗粒在作为酶联免疫检测中使用的标记中的应用。

本发明的最后一个目的是提供一种酶联免疫试剂盒。

本发明提供的酶联免疫试剂盒包括Au@Pt纳米颗粒标记的二抗。

上述试剂盒中，所述Au@Pt纳米颗粒标记的二抗按照如下方法制备得到：

A、将Au@Pt纳米颗粒制成Au@Pt纳米颗粒悬浮液；

B、将Au@Pt纳米颗粒悬浮液离心，得到Au@Pt纳米颗粒沉淀物；

C、向Au@Pt纳米颗粒的水悬液中加入聚苯乙烯磺酸酯，反应；

D、反应后离心，倒掉上清液分离出沉淀物，将沉淀物用水溶解，得到修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液；