[发明专利]肝癌诊断标志物黑素瘤细胞黏附分子及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤学和诊断领域。更具体地，本发明涉及一种诊断肝癌的标志物及其用途。

背景技术

肝癌是中国常见的恶性肿瘤，位居肿瘤发生率的第三位，死亡率的第二位。原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的肝癌类型。

中国的肝癌患者占全世界发病率的54％，男性较女性更易发病。目前肝癌患者的5年生存率不到5％。全世界每年大约有549000名患者死于此，且其发病率有逐年上升的趋势(来自WHO死亡率数据库)。因此，加大对肝癌的防治力度对降低死亡率具有重要意义。

目前肝癌的诊断主要依靠影像学检查、肝穿刺组织学检查以及实验室检查。影像学诊断在肝癌诊断中起重要的作用，但是在诊断小肝癌及区分良恶性结节中均具有一定的局限性。肝硬化基础上肝内再生结节和发育不良的结节等良性病变较为常见，与肝癌的影像学特征有一定的重叠，放射学检查对肝内小的良恶性病变鉴别仍很困难。与肝脏病理对比，CT诊断肝癌的敏感度较低。有创的组织病理学检查是诊断肝癌的主要方法，即使是很好的细针穿刺仍因取材有限而有较高的假阴性率，并且有使肿瘤扩散和针道种植的危险。因此，临床仍需要高度敏感的血清肝癌特异性标志物来鉴别肝脏良恶性病变，或在高危人群进行随访提高肝癌的早期诊断率。

肝癌的早期诊断是提高患者生存率的一项最重要因素。目前在临床使用的肝癌血清诊断标志物主要是甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)。虽然甲胎蛋白在肝癌的诊断中起了积极的作用，但其敏感性和特异性还不令人满意，而且在新发病例中AFP阴性比例在不断增加。

因此，寻找新的具有诊断或联合诊断价值的肝癌血清标志物是当务之急，也是HCC早发现早治疗的关键。因此，提供在肝癌组织和血清中特异高表达的基因或蛋白质具有重要的诊断和治疗意义，本领域迫切需要开发用于检测或判断肝癌的血清特异标志物。

发明内容

本发明的目的就是提供一种可用于检测或判断肝癌的血清特异标志物及其用途。

YAP(Yes-Associated Protein)已被发现可促进细胞增殖及转化[1]。YAP在肝细胞肝癌(HCC)中的过表达与较低程度的肿瘤分化具有显著的相关性[2]。近来的研究表明，核YAP的表达和活性的提高与胆酸诱导的HCC有着密切的联系[3]。在小鼠实验中，YAP过表达使肝尺寸不可逆地增大4倍以上[4]。相反，敲除肝中的YAP不仅导致肝细胞存活中的缺陷，还会导致胆管上皮细胞发育的重大缺陷[5]。这些结果表明，YAP活化在肝癌发展中有着重要的作用。

YAP作为辅助因子能够提高几种转录因子的转录活性，这些转录因子包括TEAD、ErbB4和Runx2[6]。尽管已经鉴定了包括存活蛋白(Survivin)、CTGF和周期蛋白D1(Cyclin D1)等数个影响HCC细胞去分化、抗细胞凋亡抗性和体内细胞生长的YAP靶基因[7-8]，但还有哪些能够反映YAP功能似乎很有可能仍然不清楚，特别是那些可在血清中检测到并可用作非侵入诊断肿瘤标志物的分子。膜蛋白很有希望用作候选分子，它们来自肿瘤损伤并易于释放入血流中。但是，迄今仍没有肝癌特异性的YAP依赖性膜蛋白的详细报道。最近的研究表明，Hippo信号传导可导致YAP功能失活[9-10]。除Hippo信号传导外，YAP在肝癌中的致瘤性的保持依赖于多种癌蛋白的配合作用，这些癌蛋白包括TRIB2、c-Myc、CREB、MEK1和SRSF1[11-15]。虽然逐渐鉴定了许多调节YAP功能的核和细胞质蛋白，但是可调控YAP活性并可用作直接治疗靶的膜蛋白仍是未知的。

在本发明中，申请人将黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)鉴定为YAP依赖性肝癌的新型血清肿瘤标志物。本申请人的实验结果同时证明，MCAM活性对于肝癌细胞存活和转化是至关重要的，表明其可作为潜在的直接抗癌药靶加以应用。

本发明的第一方面，提供了一种黑素瘤细胞黏附分子(MCAM)的基因、mRNA或cDNA的用途，用作检测肝癌的标志物；或用于制备检测肝癌的试剂或试剂盒。更优选，所述检测是血清检测。

在另一个优选实施方案中，所述试剂包括抗体、引物、探针、核酸微阵列(例如DNA微阵列)或蛋白质微阵列。

在本发明的第二方面，提供了MCAM或其特异性抗体的用途，用于制备检测肝癌的诊断试剂或试剂盒。更优选，所述检测是血清检测。

在本发明的第三方面，提供了用于检测肝癌的诊断试剂盒，所述试剂盒包含：

(a)抗MCAM抗体；和/或