[发明专利]一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法在审
| 申请号： | 201410728892.7 | 申请日： | 2014-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN104459152A | 公开（公告）日： | 2015-03-25 |
| 发明（设计）人： | 黄玉香;高宏;吴松洁;刘培方;李环宇 | 申请（专利权）人： | 青岛拓新生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/558 |
| 代理公司： | 青岛联智专利商标事务所有限公司 37101 | 代理人： | 崔滨生 |
| 地址： | 266000 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 胶体 免疫 层析 技术 精子 浓度 快速 检测 方法 | ||
1.一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：以精子顶体蛋白为检测标志物，将精液稀释于缓冲液中，使精子顶体蛋白从精子细胞中释放至缓冲液中，再与免疫层析试纸条反应，得到检测结果。
2.根据权利要求1所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述待测精液与缓冲液的体积比为1:3-5。
3.根据权利要求1所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有表面活性剂，所述表面活性剂为聚乙二醇辛基苯基醚，所述表面活性剂与缓冲液的质量比为1:80-120。
4.根据权利要求1所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述免疫层析试纸条包括样品垫、胶体金膜、包被膜、吸收垫、塑料板，所述样品垫的尾端位于胶体金膜首端的上面，所述胶体金膜的尾端位于包被膜首端的上面，所述包被膜的尾端位于吸收垫首端的下面，所述塑料板位于层析试纸的下面；所述包被膜上包被检测带T和质控线C，所述检测带T靠近胶体金膜一端，所述质控线C靠近吸收垫一端。
5.根据权利要求4所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述检测线T处包被由大肠杆菌重组表达的ACRV1蛋白，包被量为0.6-0.8μl/cm，所述ACRV1蛋白浓度为100-500μg/m。
6.根据权利要求4所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述质控线C处包被抗小鼠IgG 抗体，包被量为0.6-0.8μl/cm，所述抗小鼠IgG 抗体浓度为500-1000μg/ml。
7.根据权利要求4所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述胶体金膜为玻璃纤维膜，膜上负载金标ACRV1单克隆抗体。
8.根据权利要求7所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述金标ACRV1单克隆抗体的制备方法为：在胶体金溶液中加入金标ACRV1单克隆抗体，混匀，静置5min，加入牛血清白蛋白溶液，混匀，静置5min；高速离心收集沉淀，将沉淀用缓冲液定容至原胶体金溶液体积的1/10，得到金标ACRV1单克隆抗体。
9.根据权利要求8所述的一种基于胶体金免疫层析技术的精子浓度快速检测方法，其特征在于：所述胶体金溶液中按照30μg/ml的比例加入ACRV1抗体。
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