[发明专利]一种制备利西拉来的方法

说明书

本发明涉及一种制备利西拉来的方法，采用片段缩合方法合成利西拉来，具体采用片段20‑44肽树脂与片段15‑19进行固相缩合，然后逐步偶联剩余氨基酸至固相合成结束。与常规的逐步偶联相比，提高了粗肽纯度和纯化收率。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种制备利西拉来的方法。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种因胰岛素绝对或相对不足或靶细胞对胰岛素敏感性减低引起的以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病，其严重影响患者的健康和生活质量。临床上将糖尿病分为胰岛素依赖型糖尿病(Ⅰ型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(Ⅱ型糖尿病)，其中Ⅱ型糖尿病患者占90％以上。利西拉来(lixisenatide)是全球第四个上市的的肠促胰岛素类似物，其适应症为每日一次，联合口服降糖药或基础胰岛素一起治疗成人Ⅱ型糖尿病。

临床研究表明，对于二甲双胍控制不佳的II型糖尿病患者，每日1次20μg(早上或晚上)利西拉来给药显著改善血糖控制，餐后给药效果明显，且药物耐受性良好。利西拉来结构如下：

专利CN201210030151.2公开了纯固相顺序偶联的方法进行肽的合成。以氨基树脂为载体，采用常规顺序偶联，最终切割得到利西拉来。US6528486公开的合成方法为Fmoc/tBu策略的逐步缩合方法，WO2005058954公开的合成方法则包括Fmoc/tBu策略的逐步缩合方法，Boc策略的逐步缩合方法及基因工程，WO2001004156公开的合成方法为Fmoc/tBu策略的逐步缩合方法。

然而，现有技术中，粗肽纯度及纯化后收率均相对较低。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺点，提供一种制备利西拉来的新方法。

发明人发现，采用常规的Fmoc/tBu策略逐步偶联存在如下问题：由于树脂固相偶联时存在着明显收缩情况，在偶联至片段15-19中的五个氨基酸(Glu¹⁵、Glu¹⁶、Glu¹⁷、Ala¹⁸、Vla¹⁹)时，这五个氨基酸容易产生偶联不完全的缺损肽，从而降低粗肽纯度，增加纯化难度并进一步降低产品收率。

为解决上述问题，本发明采用片段缩合方法合成利西拉来，具体采用片段20-44肽树脂(即H-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Resin)与片段15-19(即Fmoc-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Val-OH)进行固相缩合，然后逐步偶联剩余氨基酸至固相合成结束。

基于此，本发明提供一种制备利西拉来的方法，包括以下步骤：

(1)将Fmoc-Lys(Boc)-OH与树脂偶联，得到Fmoc-Lys(Boc)-Resin；

(2)采用Fmoc保护氨基酸，按照固相合成操作，依利西拉来氨基酸顺序进行依次偶联，得到利西拉来全保护20-44片段肽树脂(即H-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Glu(OtBu)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(Trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Resin)；