[发明专利]一种用于检测PIK3CA基因突变的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测受试者中PIK3CA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括分开设置的第1-6号试剂，并且：

a.第1号试剂包含序列为SEQ ID NO:1的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A；

b.第2号试剂包含序列为SEQ ID NO:4的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A；

c.第3号试剂包含序列为SEQ ID NO:5的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物、探针A和MGB阻断核酸C；

d.第4号试剂包含序列为SEQ ID NO:7的正向引物、序列为SEQ ID NO:8的反向引物和探针B；

e.第5号试剂包含序列为SEQ ID NO:10的正向引物、序列为SEQ ID NO:8的反向引物和探针B；

f.第6号试剂包含序列为SEQ ID NO:11的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A；

其中探针A由序列为SEQ ID NO:3的核酸、该核酸的5’端连接的荧光报告基团和该核酸的3’端连接的荧光淬灭基团组成；

探针B由序列为SEQ ID NO:9的核酸、该核酸的5’端连接的荧光报告基团和该核酸的3’端连接的荧光淬灭基团组成；

所述的MGB阻断核酸C的核酸序列为SEQ ID NO:6，其包括MGB基团修饰，且3’端脱氧核糖核苷酸骨架上的3’羟基被封闭；

优选地，所述的受试者是人类癌症患者；

进一步优选地，所述的受试者是采用了PI3K抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)等PI3K通路相关靶向药物治疗的人类癌症患者。

2.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

所述的第1号试剂中，序列为SEQ ID NO:1的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A的摩尔比为0.2μM-1μM：0.2μM-1μM：0.1μM-0.5μM；

所述的第2号试剂中，序列为SEQ ID NO:4的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A的摩尔比为0.2μM-1μM：0.2μM-1μM：0.1μM-0.5μM；

所述的第3号试剂中，序列为SEQ ID NO:5的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物、探针A和MGB阻断核酸C的摩尔比为0.2μM-1μM：0.2μM-1μM：0.1μM-0.5μM：0.8μM-4μM；

所述的第4号试剂中，序列为SEQ ID NO:7的正向引物、序列为SEQ ID NO:8的反向引物和探针B的摩尔比为0.2μM-1μM：0.2μM-1μM：0.1μM-0.5μM；

所述的第5号试剂中，序列为SEQ ID NO:10的正向引物、序列为SEQ ID NO:8的反向引物和探针B的摩尔比为0.2μM-1μM：0.2μM-1μM：0.1μM-0.5μM；

所述的第6号试剂中，序列为SEQ ID NO:11的正向引物、序列为SEQ ID NO:2的反向引物和探针A的摩尔比为0.2μM-1μM：0.2μM-1μM：0.1μM-0.5μM。

3.权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，在所述探针A和探针B中，所述的荧光报告基团选自FAM、VIC、ROX、HEX、CY3、CY5和波长范围相似的其它荧光报告基团；所述荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2和NFQ，并且荧光报告基团与荧光报告基团的搭配根据荧光能量共振转移原理来选择；

优选地，所述的探针A和探针B的3’端荧光淬灭基团是MGB-NFQ。

4.权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第1-6号试剂中还分别包含PCR缓冲液、ROX参比染料和Taq酶的一种或多种；

优选地，所述的PCR缓冲液包含Tris-HCl、(NH)₂SO₄、MgCl₂、Tween 20和dNTPs；

进一步优选地，所述的Tris-HCl、(NH)₂SO₄、MgCl₂、Tween 20和dNTPs的浓度分别为50-100mM、5-30mM、1-8mM、5％-15％、和100-200μM。