[发明专利]一种同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药材化学成分检测领域，具体为一种利用超高效液相色谱法同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法。

背景技术

桃金娘(Rhodomyrtus tomentosa)是一种优良的野生植物资源，自然资源丰富，医药、保健利用价值高，主要分布在东南亚国家，尤盛产于中国和日本的南部等地区；桃金娘根(Radix Rhodomyrti)为桃金娘的干燥根，桃金娘根中化学成分主要为鞣质类、三萜类、黄酮类等，其中以没食子酸和鞣花酸为代表的鞣质类化合物是桃金娘根的主要有效成分，也是评价桃金娘根质量的主要指标。

目前，没食子酸和鞣花酸的检测方法有分光光度法、高效液相色谱法和高效液相色谱串联质谱法等。分光光度法检测繁琐，灵敏度低，重现性差；高效液相色谱法耗时长，试剂消耗大；高效液相色谱串联质谱法虽然具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，但是仪器价格昂贵、维护繁琐，普及率不高。

发明内容

超高效液相色谱(UPLC)是一种基于小颗粒填料技术，具有超高速度、分离度和灵敏度以及低耗的新一代液相分离技术，本发明要解决的技术问题是，基于UPLC建立一种简便、快速、试剂消耗少、灵敏度高、能够同时测定桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量的方法。

本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是：一种超高效液相色谱同时检测桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的方法，包括以下步骤：

(1)桃金娘根药材鉴定；

(2)标准溶液的配置：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于100mL棕色容量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含没食子酸10.00～150.0μg/mL和鞣花酸10.00～150.0μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用二甲基亚砜依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；

(3)样品前处理：将桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；准确称取0.1～1.0g桃金娘根粉末置于100ml具塞锥形瓶中，精密加入10～150mL甲醇，称定重量，按照50～1500W、25～100kHz和25～60℃的条件进行超声提取10～90min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，蒸干，二甲基亚砜溶解并定容至25ml容量瓶中，过0.19～0.45μm滤膜后供含量测试用；

(4)超高效液相色谱检测，色谱条件如下：

色谱柱：Waters BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相：乙腈-0.2％磷酸；梯度洗脱条件：第0～2min使用6％乙腈；第2～3min使用6％～16％乙腈；第3～8min使用16％～20％乙腈；检测波长：第0～2min检测波长为215～300nm；第2～8min检测波长为220～385nm；流速：0.1～0.5ml/min；柱温：20～45℃；进样体积0.3～10μL。

进一步地，本发明还包括以下用于验证所述的方法的精密度、稳定性和回收率的步骤：

(5)方法线性范围、精密度和检出限计算：在上述色谱条件下，分别精密吸取不同浓度的没食子酸和鞣花酸的混合对照品溶液注入液相色谱仪，以色谱峰峰面积(y)为纵坐标，以浓度(x)为横坐标，绘制标准曲线；对没食子酸和鞣花酸混合对照品溶液进行3～17次平行测定，计算没食子酸和鞣花酸峰面积和迁移时间的RSD，验证方法精密度；根据IUPAC规定，计算本法检出限。

(6)稳定性试验：精密称取样品粉末，按步骤(3)样品前处理方法处理制备供试品，分别在制备后0、1、2、4、8、12、24h进样，测定峰面积；计算没食子酸和鞣花酸峰面积的相对标准偏差，验证样品在24h内是否稳定。

(7)回收率试验：精密称取桃金娘根粉末样品9份，按步骤(3)样品前处理制备供试品方法制备供试品，分别向每一份供试品添加步骤(2)制备的含没食子酸和鞣花酸混合标准溶液，每个混合标准溶液浓度制备三份平行样品，并进样分析，计算回收率和相对标准偏差。

本发明利用超高效液相色谱法同时检测桃金娘根没食子酸和鞣花酸的方法，与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

(1)本发明超高效液相色谱法同时检测桃金娘根没食子酸和鞣花酸，样品前处理采用超声提取，整个检测时间8min，流动相试剂消耗仅需2mL，具有简便、快速、试剂消耗少、灵敏度高、重现性好等优点。

(2)根据IUPAC规定，本发明检出限(3σ,n＝11)没食子酸为0.45ng/mL，鞣花酸为0.23ng/mL。