[发明专利]一种卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及的是一种卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因及含有该基因的表达载体和重组菌株，以及通过重组菌株得到的重组蛋白。

背景技术

过氧化物还原酶(Peroxiredoxins，Prxs)是生物体内一类重要的抗氧化酶类，通过催化H₂O₂和脂质氢过氧化物还原，避免细胞受到进一步损伤。所有Prx在N末端都含有一个保守的Cys残基，隶属于过氧化物酶家族，与其他过氧化物酶相比，最大特点是绝大部分Prx在体内以Trx为唯一氢供体。1988年，Kim酿酒酵母里发现Prx。此后，人们相继在原生生物、植物、动物、寄生虫中，乃至古细菌和真细菌体内都发现了这种酶。根据所含Cys残基数目不同，可把过氧化物还原酶分为2类：(1)1-Cys Prx。该型在52位有一个高度保守的Cys残基，如在人体中的Prx6；(2)典型2-Cys型。52位和172位上分别有一个保守的Cys残基，同时C-端有一个保守的Cys，如Prx1-4；(3)非典型2-Cys型。C-端含额外两个较低保守性的Cys残基，N-端带正电荷氨基酸残基分散于疏水性氨基酸序列中，如Prx5。因此，过氧化物还原酶开发和应用研究已成为国内过饲料科学和药理学研究热点，在动植物转基因工程及药物开发领域有着广阔的前景。

卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)隶属脊索动物门(Chordata)，硬骨鱼纲(Osteichthyes)，鲈形目(Perciformes)，鲈亚目(Percoidei)，鲹科(Carangidae)，为名贵食用鱼类，在我国南方海域已有相当的人工养殖规模。然而，近年来卵形鲳鲹病害频发，引起了较高的死亡率，成为制约卵形鲳鲹养殖产业可持续发展的技术瓶颈之一。目前，还未有人对卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因进行研究。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1(Peroxiredoxin 1型)的cDNA和由此推断的氨基酸序列。

本发明的第二个目的在于提供包含上述卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1的表达载体和利用该表达载体转化的重组微生物。

本发明的第三个目的在于提供一种从所述的微生物制备重组卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1的过程。

本发明的第一个目的是通过如下技术方案来实现的：一种卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1的cDNA，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

由其推断的卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1的氨基酸序列如SEQ ID：2所示。

本发明的卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1的全长基因是以转录组测序得到卵形鲳鲹过氧化物还原酶序列，以卵形鲳鲹肝脏总RNA反转录得到的cDNA为模板，然后经Smart-RACE方法扩增得到末端序列，最后经序列拼接获得卵形鲳鲹过氧化物还原酶cDNA基因全长序列。

本发明用于表达卵形鲳鲹过氧化物还原酶重组蛋白的过氧化物还原酶成熟肽基因序列是以卵形鲳鲹过氧化物还原酶cDNA为模板，经PCR方法扩增而得到的，它来源于卵形鲳鲹过氧化物还原酶全长基因的成熟肽区域所对应的基因片段。

按照上述的卵形鲳鲹过氧化物还原酶重组蛋白的成熟肽基因序列，它正好是卵形鲳鲹过氧化物还原酶全长基因128bp至721bp(相当于第43至第240位氨基酸)的片段，其核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列如下所示。

卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因的cDNA，它的核苷酸序列如下所示：

其中底部下划线部分为卵形鲳鲹过氧化物还原酶的成熟肽的DNA序列。

卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因的氨基酸序列如下所示：

卵形鲳鲹过氧化物还原酶的成熟肽的氨基酸序列。

本发明的氨基酸序列分析表明卵形鲳鲹过氧化物还原酶由197个氨基酸参加组成，无信号肽序列，197个氨基酸序列为成熟肽序列。

本发明的第二个目的是通过如下技术方案来实现的：一种表达载体，其为含有上述卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因Prx1的cDNA的表达载体；以及利用上述载体转化的重组微生物。

本发明所述的表达载体的构建方法是按常规方法，将通过PCR方法合成的卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因经酶切和分离纯化后，连接到已有的相应载体的相应酶切位点(即BamHⅠ和HindⅢ)之间，即构建成所需的含有卵形鲳鲹过氧化物还原酶基因的表达载体。