[发明专利]一种分离纯化锁阳黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离纯化技术领域，具体涉及一种锁阳黄酮的分离方法。

背景技术

锁阳为锁阳科(Cynomoraceae)植物锁阳(Cynomorium Songaricum Rupr.)的干燥肉质茎，又名“不老药”、“金不换”、“沙漠人参”等。植物锁阳主要分布于内蒙古、宁夏、新疆、甘肃、青海等西北地区。锁阳味甘、性温，具有补肾、助阳、益精、润肠之功效，中医常用于治疗肾阳不足、精血亏虚、腰膝萎软、阳痿滑精、肠燥便秘等症。现代药理学研究表明,锁阳具有提高机体免疫力、清除自由基、抑制人体免疫缺陷病毒(HIV)、抑制血小板聚集等多种药理活性。

锁阳中含有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌等多种生理活性及药理作用,且无毒无害,对治疗和预防肿瘤、心血管病等疾病的有显著的效果，对延缓人体的衰老有重要意义，因此锁阳黄酮成为近年来研究、开发和利用的热点。据文献调研，目前关于锁阳黄酮的研究主要集中于锁阳黄酮的提取方法，而对于锁阳黄酮分离纯化工艺的系统研究较少。目前采用的锁阳黄酮分离纯化工艺普遍存在提取率低、锁阳总黄酮的含量低、不易工业化等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种锁阳黄酮的分离方法，能够高效的从锁阳中分离锁阳黄酮，从而弥补现有技术的不足。

申请人在研究中发现，锁阳中除了锁阳黄酮外，还有大量的淀粉、鞣质和蛋白质等。这些成分一方面影响在提取过程中锁阳黄酮的溶出，从而导致锁阳黄酮提取率的降低；另一方面，鞣质等水溶性杂质大量溶于提取液中，导致锁阳黄酮分离纯化困难，纯度降低。本发明首先利用混合酶将锁阳的细胞壁、淀粉和蛋白类化合物水解，使锁阳黄酮充分分散在提取溶剂体系内；然后利用石灰水增加黄酮类物质的溶解性，使一些鞣质和水溶性杂质生成钙盐沉淀；最后将混合大孔吸附树脂(MAR)模拟移动床应用于锁阳黄酮的分离。

本发明的方法，包括有如下的步骤：

1)将锁阳粉碎，将纤维素酶和α-淀粉酶的复合酶水溶液加入到粉碎的锁阳中进行提取；所述的复合酶水溶液的pH值为5.0，提取温度为55℃；

2)向步骤1)的提取液中加入生石灰，至提取液有的pH值为11，在90～95℃提取2h，然后调节pH为8～9，放置4h后弃去沉淀，对上清液减压浓缩后，用盐酸调节pH为5～7；

3)向步骤2)的pH为5～7的上清液中加入乙醇进行沉淀，静置24h后过滤，弃去沉淀，得到上清液；

4)将步骤3)的上清液减压浓缩，然后加入到混合MAR模拟移动床进行吸附，流速为5～10BV/h(柱体积，简称BV)，弃去吸附残液；吸附结束后，用10～40BV的水进行清洗，流速为5～10BV/h，弃去清洗液；

5)用10～40BV的洗脱液进行洗脱，流速为5～10BV/h，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩、干燥后得到锁阳黄酮产品。

上述步骤1)中纤维素酶用量为5～15U/g，α-淀粉酶用量为50～100U/g，以锁阳的量作为基准；

上述步骤4)中混合MAR模拟移动床中包含有2～4根MAR柱；每根MAR柱之间即可串联也可并联，其中至少有2根MAR柱串联，MAR柱径高比为1:4～1:12。所用MAR柱使用XDA-8、AB-8、D101、LSA-21中的一种或几种以不同比例混合的树脂；

为了获得更好的分离效果，上述步骤4)中的大孔吸附树脂为混合树脂，其中XDA-8：AB-8：LSA-21的质量比为5:1:1；

上述步骤4)中的洗脱液为70～80％的乙醇；

上述步骤5)的干燥方法为喷雾干燥、低温冷冻干燥、微波干燥、真空干燥、鼓风干燥中的一种或几种。

本发明的的方法所得的锁阳黄酮的提取率大于90％，纯度均达到90％以上，而且在生产过程中使用绿色溶剂，成本低、效率高、环境友好、工艺路线简单，可为药物、保健品或食品等提供高纯度的锁阳黄酮，便于锁阳类产品的工业化生产

具体实施方式

本发明方法对锁阳黄酮的提取率大于90％，提取纯化的锁阳黄酮纯度均达到90％以上，可用作提高免疫力、缓解体力疲劳、抗氧化、抗衰老、提高缺氧耐受力、祛痤疮、祛黄褐斑、改善皮肤水份类药物、保健食品原料或新食品原料。

下面对本发明所涉及的锁阳总黄酮的检测方法记录如下：

A.1方法提要