[发明专利]一种GP73、PIVKA-Ⅱ联合检测试剂盒

权利要求书

1.一种定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73、维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ的检测试剂盒，包括互相独立的高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡，所述检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述所述高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡的金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体，所述维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡的金标垫上包含维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体采用荧光微球标记。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。

3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡的检测线上包被有高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体；所述维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡的检测线上包被有维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，各质控线上包被羊抗鼠抗体。

5.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为20-200mM。

6.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各金标垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为5-50mM。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液中还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。

8.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有两个平行的试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有两个测试窗和两个加样孔，所述两个测试窗的位置分别与两个试纸卡的检测线和质控线的位置相配合，所述两个加样孔的位置与两个试纸卡的样品垫的位置相配合。

9.如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述两个加样孔之间还设有连接两个加样孔的横槽。

10.根据权利要求1～9任一权利要求所述的检测试剂盒的制备方法，具体包括如下步骤：

1)用荧光微球标记的高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体溶液分别喷涂各自对应的金标垫，制得分别包含高尔基体糖蛋白-73GP73抗体和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体的金标垫；

2)在高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体及羊抗鼠抗体；在维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡的硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ抗体及羊抗鼠抗体；

3)将两套样品垫、步骤1)制备的两套金标垫、步骤2)制备的两套硝酸纤维素膜、两套吸水垫依次粘贴在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。